八棱丝瓜蛋白的分离纯化、生化性质鉴定和晶体生长的初步研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 林峻凯 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2002 |
| 授予单位 | 中国科学院福建物质结构研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院福建物质结构研究所 |
| 导师 | 孙明晃 |
| 关键词 | 八棱丝瓜 核糖体失活蛋白 RNA N一糖苷酶 分离纯化 晶体生长 |
| 中文摘要 | 本论文的研究内容属于国家自然科学基金课题“八棱丝瓜蛋白的结构与抗肿瘤活性研究”的一部分，包括八棱丝瓜种子核糖体失活蛋白的分离纯化、部分生化性质鉴定及晶体培养。从葫芦科丝瓜属植物八棱丝瓜（Luffa acutangula)的种子中，经醋酸盐缓冲液抽提、SP-Sepharose Fast Flow泊离子交换层析、CM-52阳离子交换层析和Blue Sepharose 6 Fast Flow亲和层析等步骤，分离纯化到2种主要蛋白组分Luffaculin-1和luffaculin-2。它们在反相毛细管液相色谱（reverse-phase capillary liquid chroma七ography, RP-CLC）上均呈单一峰，在SDS-PAGE和IEF上均显示为单一条带。在紫外区表现典型的蛋白吸收光谱。还原和非还原SDS-PAGE法测得Luffaculin-1和Luffaculin-2的分子量均为28kD，IEF法测得它们的等电点分别为8.86和9.05.用酸解法测定了它们的氨基酸组成。实验证实Luffaculin-1和Luffaculin-2均为糖蛋白。蛋白质合成抑制活性测试表明，它们对蛋白质合成具较强的抑制作用。通过对大鼠肝核糖体作用的研究，证实它们具有RNA N-糖昔酶活性，初步表明它们是单链核糖体失活蛋白。体外抑制肿瘤细胞生长活性检测表明，Luffaculin-1和Luffaculin-2对人白血病细胞株K562有较强的毒性，IC_(50)分别为1. 1*10~（-6）mo1/L和2.0*10~（-7）mol/L。因此，八棱丝瓜种子核糖体失活蛋白具有可以用于或构成免疫毒素治疗癌症的应用前景。Luffaculin-1经悬滴气相扩散法获得棒状晶体，其生长条件为：0. 2mol/LNaCl, 30% PEG6K, 0. 05mol/L PB缓冲液(pH6. 5），晶体最大线度为0.1*0.1*3.Omm,经染色反应、破碎实验、电泳鉴定证明其为蛋白质晶体。Luffaculin-2己经长出微晶，目前正在优化晶体生长条件。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-05-07 |
| 页码 | 59 |
| 源URL | [http://ir.fjirsm.ac.cn/handle/350002/7064]  |
| 专题 | 福建物质结构研究所_中科院福建物质结构研究所_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 林峻凯. 八棱丝瓜蛋白的分离纯化、生化性质鉴定和晶体生长的初步研究[D]. 中国科学院福建物质结构研究所. 中国科学院福建物质结构研究所. 2002. |
入库方式： OAI收割
来源：福建物质结构研究所
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