人血清白蛋白的表达和结构研究以及蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 朱丽丽 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-06-06 |
| 授予单位 | 中国科学院福建物质结构研究所 |
| 授予地点 | 福建物质结构研究所 |
| 导师 | 黄明东 |
| 关键词 | 人血清白蛋白 药物结合位点 结构生物学 克隆表达 蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 去整合素 抑制血小板聚集 降解纤维蛋白原 抑制肿瘤细胞生长 毕赤酵母 |
| 其他题名 | Structural Studies of Human Serum Albumin and Expression of recombinant Metalloproteinases Jerdonitin |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 中文摘要 | 1.人血清白蛋白与药物相互作用的结构生物学研究 齐多夫定（3′-Azido-3′-deoxythymidine，AZT）是第一个临床用于治疗人类免疫缺陷病毒感染的有效药物。药物与人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)的相互作用一直是研究药物作用机制的一个重要组成部分，如研究药物分布及在多种药物共同治疗时药物-药物与 HSA 的相互作用。目前我成功解析了有关 HSA的一个三元复合物晶体结构HSA-Myr-AZT 和一个四元复合物晶体结构 HSA-Myr-AZT-SAL ( Myr: 十四烷脂肪酸酸, SAL: 水杨酸，AZT：齐多夫定)。分析比较复合物HSA-Myr-AZT 的晶体结构和先前报道的有关 HSA 的晶体结构，揭示了 IIA 亚域的一个新亚结合位点即齐多夫定(AZT)亚结合位点，从而将人血清白蛋白的 II A 亚域结合位点分为3个亚结合位点：水杨酸（SAL）亚结合位点, 茚甲新(indomethacin)亚结合位点和齐多夫定(AZT)亚结合位点。分析四元复合物晶体结构 HSA-Myr-AZT-SAL得出，齐多夫定和水杨酸可以共同结合在 HSA 的 IIA 亚域；并且水杨酸取代齐多夫定结合在 HSA 的IB 亚域，说明水杨酸在 IB 亚域的结合力大于齐多夫定在 IB 亚域的结合力。该四元复合物结构揭示了在多种药物共同治疗疾病时，药物之间可能产生协同作用结合在 HSA 的同一结合位点，或者药物之间产生竞争作用，从而一种药物取代另外一种药物结合于HSA 的结合位点。以上实验结果为研究人血清白蛋白和药物的相互作用及药物－药物间相互作用，优化合成新药，研究多种药物共同治疗疾病及合理给药提供了新的结构信息。 2. 酵母表达重组人血清白蛋白的菌株构建 人血清白蛋白(HSA)是血浆中最丰富的蛋白质成分，约占血浆总蛋白的60％，在人体内具有维持血液渗透压和携带血液中多种配基与组织进行交换等生理功能。临床医疗中用于手术输血和危重病人补液，治疗创伤休克、发烧、水肿和大出血，且能增强人体抵抗力，是重要的临床药物。现在临床上人血清白蛋白主要是靠收集人的血液通过分级过滤获得。由于人血清白蛋白在临床上应广泛，市场巨大。面对如此巨大的需求量，单靠人血液提取人血清白蛋白是难以满足的，同时，人血来源极其复杂，容易导致污染，如肝炎病毒，艾滋病毒等。为了缓解这些矛盾，通过基因工程技术获得重组人血清白蛋白具有很大应用前景。本论文详细介绍并成功构建酵母表达重组人血清白蛋白表达菌株。 3. 重组蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 的高效稳定表达、纯化及其应用 蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 属于一种新型的II型蛇毒金属蛋白酶。 Jerdonitin 的cDNA 由金属蛋白酶、间隔区和去整合素区组成，说明它是二型蛇毒金属蛋白酶。与其它二型蛇毒金属蛋白酶不同的是，Jerdonitin 的成熟蛋白经过后翻译加工过程仍由金属蛋白酶、间隔区和去整合素区组成。目前我们建立了一套完善的蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 在巴斯德毕氏酵母中高效稳定表达和纯化的技术方法，并发现本重组蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 不仅具有接近于野生型蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 的抑制血小板聚集的活性和降解纤维蛋白原的活性，而且首次验证了其能够抑制肿瘤细胞的生长。该重组蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 的获得方法具有直接表达、成本低，稳定性高，表达量高、分离纯化工艺简便、活性高等特点。该重组蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 不仅可以满足市场需要，又能保护蛇资源。该重组蛇毒金属蛋白酶 Jerdonitin 可考虑作为新型抗血栓和抗肿瘤药物，为临床治疗提供新的思维和手段。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-05-09 |
| 页码 | 140 |
| 源URL | [http://ir.fjirsm.ac.cn/handle/350002/7514]  |
| 专题 | 福建物质结构研究所_中科院福建物质结构研究所_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 朱丽丽. 人血清白蛋白的表达和结构研究以及蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的研究[D]. 福建物质结构研究所. 中国科学院福建物质结构研究所. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：福建物质结构研究所
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