Tor系统若干蛋白的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 黄维 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2007-06-04 |
| 授予单位 | 中国科学院福建物质结构研究所 |
| 授予地点 | 福建物质结构研究所 |
| 导师 | 黄明东 |
| 关键词 | 蛋白质纯化 混合 结晶 相互作用 硒代 |
| 其他题名 | Research on Several Proteins of Tor System |
| 学位专业 | 物理化学（含：化学物理） |
| 中文摘要 | 细菌和某些真核生物使用二组分信号转导体系来检测和应对环境变化，从而引起细胞反应。由于二组分体系普遍出现在细菌中，可用于研究细菌的毒性和抗药性等，使其非常适合作为药物设计的靶点。 在大肠杆菌系统中表达出Tor系统中的蛋白TorR、TorRc、Int和TorI蛋白质，并进行蛋白质纯化。TorR得到了足够进行结构研究的蛋白质。TorRc纯化时在脱盐过程中加入500mM NaCl可以防止TorRc的沉淀，但妨碍了TorRc蛋白的晶体生长。Int蛋白得到很纯的蛋白。TorI在Tris-HCl pH8.5 0.1M,24%(W/V)PEG3350的条件下，采用汽相扩散法(悬滴法)获得分辨率为2.1 Å蛋白质晶体，为单斜晶系，晶胞参数为a=46.21 Å , b=53.99 Å , c=73.56 Å，α= 90.00°,β= 106.40°,γ= 90.00°。结构解析使用分子取代法，以TorI的NMR结构作模板，计算得到一个较强的解，并由此判断出该晶体的正确空间群为 P21, 进一步的结构解析工作还在进行中。 本项工作也研究了蛋白之间的相互作用。用纯化的蛋白TorRc、TorI和Int以摩尔浓度TorRc ：TorI=1：2和Int：TorI=1：2比例，充分混匀后，以Superdex75凝胶过滤柱分离，没有分离出复合物组分，表明蛋白之间的结合力小于微摩尔数量级。同时用蒸汽扩散法（共晶法）进行复合物晶体生长，尚未得到复合物晶体。 论文的另外一部分为TorI的硒代甲硫氨酸蛋白衍生物（SeMET-TorI）的纯化分离和结晶。采用BL21(DE3)菌株来表达SeMET-TorI。SeMET-TorI纯化过程中发现，SeMET-TorI在浓缩过程中外界温度升高时容易产生沉淀。SeMET-TorI蛋白用汽相扩散法(悬滴法)，在0.1M Tris-HCl pH7.5、或8.0、或8.5和0.1M Hepes pH7.5的缓冲液体系,在1.65M (NH4)2SO4 均可获得针状的SeMET-TorI的晶体，但达不到适合X射线衍射的条件，SeMET-TorI蛋白晶体的生长条件需要进一步优化。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-05-09 |
| 页码 | 83 |
| 源URL | [http://ir.fjirsm.ac.cn/handle/350002/8018]  |
| 专题 | 福建物质结构研究所_中科院福建物质结构研究所_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 黄维. Tor系统若干蛋白的研究[D]. 福建物质结构研究所. 中国科学院福建物质结构研究所. 2007. |
入库方式： OAI收割
来源：福建物质结构研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。