植物DREB抗逆转录因子dsDNA芯片研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 张玉宝 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2007-05-28 |
| 授予单位 | 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 |
| 授予地点 | 寒区旱区环境与工程研究所 |
| 导师 | 谢忠奎 |
| 关键词 | dsDNA 芯片 DREB1A DREB2A 转录因子 蛋白 |
| 其他题名 | Studies of Double-stranded DNA Microarry on DREB-type Transcription Factor of Resistance Response in plant |
| 学位专业 | 生态学 |
| 中文摘要 | 植物的抗胁迫(干旱、盐碱、寒冷)功能是多种基因控制的综合反应，过去的抗逆基因工程研究一直停留在某一个或几个基因上，对基因的表达、结构和与其相关基因调控机制缺乏详细的研究。一个植物抗逆转录因子（如DREB）可以调控多个与植物干旱、高盐及低温耐受性有关的功能基因的表达。双链DNA 芯片（dsDNA, double strand DNA）能够非常有效地检测基因表达调控中序列特异性DNA（顺式作用元件）和蛋白质（转录因子）的相互作用，因此,本研究提出制备双链DNA 微阵列芯片，从蛋白质编码基因的调节区着手，研究抗逆转录因子作用机理。 在本研究中，以拟南芥为材料，以干旱、盐碱、寒冷等逆境胁迫相关的AP2/EREBP家族的DREB子家族转录因子DREB1A、DREB2A为研究靶点，通过PCR和RT-RCR扩增得到抗逆转录因子DREB1A、DREB2A基因，将其分别克隆到PUCm-T载体中，序列分析表明获得的基因序列与已报道的该基因序列完全相同。将克隆的目的基因与表达载体PET-28a(+)连接，转化大肠杆菌BL21(DE3)和RosettaTM(DE3)，DREB1A蛋白得到了成功表达，而DREB2A未表达。利用His-Tag纯化柱在AKTATM纯化仪对目的蛋白进行纯化，获得了DREB1A蛋白。 同时，对双链DNA芯片的制备方法做了初步的探讨。用Taq DNA聚合酶代替了价格昂贵的Klenow DNA聚合酶，并对Taq DNA聚合酶在片延伸体系的反应温度，Mg2+浓度以及单链探针的变性、不变性等条件进行了优化。发现利用Taq DNA聚合酶在片延伸制备双链DNA芯片时，延伸温度50℃效果较好，Mg2+浓度2.5mM效果明显好于1.5mM；单链不变性效果优于变性处理。优化方法制备的双链DNA芯片将更有利于DRE顺式作用元件与表达的DREB抗逆转录因子蛋白相互作用的研究。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-08-22 |
| 页码 | 58 |
| 源URL | [http://ir.casnw.net/handle/362004/21681]  |
| 专题 | 寒区旱区环境与工程研究所_研究生学位论文_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张玉宝. 植物DREB抗逆转录因子dsDNA芯片研究[D]. 寒区旱区环境与工程研究所. 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所. 2007. |
入库方式： OAI收割
来源：寒区旱区环境与工程研究所
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