双标记法生产转基因(Human COL1A1 cDNA)山羊胚胎的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 王亮 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2007-05-15 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 汪汉卿 ; 曹旭 |
| 关键词 | 成纤维细胞 绿色荧光蛋白 表达载体 核移植 胚胎 fibroblasts green fluorescent protein expression vector nuclear transfer embryos |
| 学位专业 | 物理化学（含：化学物理） |
| 中文摘要 | 本论文综述了Ⅰ型胶原蛋白的结构、功能及其应用研究的现状与前景，以此得出选题的依据，系统地开展了双标记法生产转基因(Human COL1A1 cDNA)山羊胚胎的研究。研究工作共分为五个部分，主要研究内容和结果如下： 1. 以莎能奶山羊皮肤组织为材料进行了细胞培养，通过分离纯化建立了莎能奶山羊皮肤成纤维细胞系。发现了一种长期超低温冻存成纤维细胞的有效方法。 2. 通过成纤维细胞基因转染实验，结果表明以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和新霉素抗性(Neor)作为双标记，可有效筛选转基因供体细胞。 3．通过实验方法的优化, 人Ⅰ型α1原胶原的长链RNA被成功地从RNA酶含量丰富的人包皮组织中分离，以此RNA作为模板，反转录合成了人Ⅰ型α1原胶原cDNA基因第一条链，完成了cDNA基因的PCR扩增和在大肠杆菌扩增质粒中的克隆，并经测序证明得到了人Ⅰ型α1原胶原cDNA基因。 4．以pBC1 质粒为基础表达质粒，以山羊β-酪蛋白基因启动子为调控元件，通过表达质粒的改造，成功构建了人Ⅰ型α1 原胶原cDNA 基因乳腺特异性表达载体，引入了具有独立表达功能的EGFP 和Neor 双标记筛选基因。将确认重构质粒送出测序，结果证明，表达载体内，目的基因无碱基缺失、阅读框正确、3’端连接有6×His蛋白分离标签。 5．利用绿色荧光蛋白(EGFP)和新霉素抗性( Neor) 基因作为双标记基因，有效地筛选了携带人Ⅰ型α1 原胶原cDNA 基因的供体成纤维细胞，提高了携带人Ⅰ型α1 原胶原cDNA 基因核移植胚胎的生产效率。 |
| 学科主题 | 天然药物 |
| 公开日期 | 2013-05-24 |
| 源URL | [http://210.77.64.217/handle/362003/3075]  |
| 专题 | 兰州化学物理研究所_中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王亮. 双标记法生产转基因(Human COL1A1 cDNA)山羊胚胎的研究[D]. 中国科学院研究生院. 2007. |
入库方式： OAI收割
来源：兰州化学物理研究所
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