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孔道形成类似蛋白Bm-ALP3的分离纯化及功能研究

文献类型:学位论文

作者王齐权
答辩日期2017-05
文献子类硕士
授予单位中国科学院大学
授予地点北京
导师张云
关键词孔道形成蛋白, 产气单胞菌溶素, Bm-alp3, 溶血, 抗氧化 Pore-forming Protein, Aerolysin, Bm-alp3, Hemolysis, Antioxidant
学位名称工学硕士
其他题名The purification and function research of pore-forming like protein Bm-ALP3
英文摘要

孔道形成蛋白是一类能够在细胞膜上寡聚化并形成孔道的蛋白,根据其在细胞膜上形成孔道二级结构类型的不同可分为 α 螺旋孔道形成蛋白和 β 折叠孔道形成蛋白。产气单胞菌溶素是由致病性细菌嗜水气单胞菌分泌的一类 β 折叠孔道形成毒素,与产气单胞菌溶素有着相似结构的蛋白称为产气单胞菌溶素类似蛋白。产气单胞菌溶素类似蛋白从细菌到高等动植物中都有分布, 但是目前关于宿主来源的产气单胞菌溶素类似蛋白的功能机制并不是很清楚。 在实验室前期的研究中, 从大蹼铃蟾中鉴定了一种脊椎动物来源的产气单胞菌溶素类似蛋白, βγ-CAT, 并对其功能进行了深入的研究。 通过对大蹼铃蟾皮肤和血液的转录组分析, 我们发现在大蹼铃蟾中存在另一种产气单胞菌溶素类似蛋白,与 βγ-CAT 的产气单胞菌溶素结构域非常相似, 将其命名为 Bm-ALP3。通过序列比较分析发现, Bm-ALP3 仅仅含有一个单独的产气单胞菌溶素结构域。 在本次研究中, 我们通过 Bm-ALP3 的兔多克隆抗体检测 Bm-ALP3 的组织分布表达,发现 Bm-ALP3 主要分布于大蹼铃蟾皮肤组织中。 通过分离纯化手段从大蹼铃蟾皮肤分泌液中得到了天然存在的 Bm-ALP3 分子,质谱鉴定发现在Bm-ALP3 氨基端第二个氨基酸丝氨酸上存在乙酰化修饰。 相比较于 βγ-CAT, Bm-ALP3 不能引起红细胞溶血,在红细胞膜上也不形成SDS 稳定的寡聚体,与目前发现的产气单胞菌溶素类似蛋白的功能不同。我们还发现, Bm-ALP3 具有抗氧化活性,通过定点突变发现抗氧化活性主要是依赖于游离的半胱氨酸,并且 Bm-ALP3 依靠二硫键的连接,可形成二聚体和高聚体。

语种中文
源URL[http://ir.kiz.ac.cn:8080/handle/152453/12418]  
专题昆明动物研究所_动物活性蛋白多肽组学
推荐引用方式
GB/T 7714
王齐权. 孔道形成类似蛋白Bm-ALP3的分离纯化及功能研究[D]. 北京. 中国科学院大学. 2017.

入库方式: OAI收割

来源:昆明动物研究所

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