重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测
文献类型：期刊论文
| 作者 | 王峰1; 黄鹏1; 刘主2; 卢韵碧1; 魏尔清1; 张纬萍1; 唐淳2 |
| 刊名 | 浙江大学学报医学版
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| 出版日期 | 2011 |
| 卷号 | 000期号:002页码:156 |
| ISSN号 | 1008-9292 |
| 英文摘要 | 目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt(H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个重组蛋白在体外酶活性。结果:测序结果表明,pET-11a(+)-hnampt(野生型)及pET-11a(+)-hnampt(H247A)(突变型)表达载体构建成功,突变位点正确。两种蛋白均在BL21star大肠杆菌获得表达,裂解后为可溶性蛋白,通过镍柱、分子筛获得纯化蛋白,SDS凝胶电泳和质谱鉴定证明重组蛋白为分子量约56 kD的NAMPT。核磁共振体外酶活性检测发现野生型NAMPT具有酶活性,而NAMPT(H247A)的酶活性降低了约5～10倍。结论:成功获得了有体外酶活性的人NAMPT蛋白和酶活性较低的人NA... |
| 语种 | 英语 |
| 源URL | [http://ir.wipm.ac.cn/handle/112942/17964]  |
| 专题 | 中国科学院武汉物理与数学研究所 |
| 作者单位 | 1.浙江大学 2.中国科学院武汉物理与数学研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王峰,黄鹏,刘主,等. 重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测[J]. 浙江大学学报医学版,2011,000(002):156. |
| APA | 王峰.,黄鹏.,刘主.,卢韵碧.,魏尔清.,...&唐淳.(2011).重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测.浙江大学学报医学版,000(002),156. |
| MLA | 王峰,et al."重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测".浙江大学学报医学版 000.002(2011):156. |
入库方式： OAI收割
来源：武汉物理与数学研究所
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