突变型人源乙酰胆碱神经受体α7的构建表达纯化
文献类型：期刊论文
| 作者 | 张斯维; 程浩; 王旻 |
| 刊名 | 药物生物技术
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| 出版日期 | 2016-04-15 |
| 卷号 | 23期号:02页码:95-98 |
| 关键词 | 神经型乙酰胆碱受体 BacMam哺乳动物细胞表达 亲和纯化 电子显微镜 |
| 文献子类 | Article |
| 英文摘要 | 为增强神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白的稳定性和表达量,以满足晶体学研究的要求。根据同源蛋白的氨基酸序列比对结果,设计了胞内5个切除位点,设计合适的引物,利用分子克隆的方法扩增出相应的改造后c DNA序列并构建到BacMam表达载体,最后利用BacMam杆状病毒表达系统构建表达突变型重组杆状病毒,并转染到HEK293F哺乳动物细胞中,诱导表达重组蛋白。采用免疫印迹法小规模表达检测后,选取合适突变型进行表达,并利用MBP亲和层析和分子排阻法进行两步纯化后,通过电子显微镜负染技术检测纯化后的蛋白质量。结果显示,成功克隆并表达了乙酰胆碱神经受体α7的5种不同的胞内区域突变型,且蛋白表达量与野生型相比均有所提高,其中P5突变型表达量最高。经表达纯化后,能够获得毫克级别的乙酰胆碱受体蛋白,并且电子显微镜观察的结果表明蛋白呈现出相对稳定的五聚体形貌,大小尺寸与理论相符。 |
| 资助项目 | 中国科学技术委员会资助项目[2013CB910600] ; 上海科学技术委员会资助项目[13ZR1447600] ; 上海科学技术委员会资助项目[13JC1406300] |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/269508]  |
| 专题 | 中国科学院上海药物研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张斯维,程浩,王旻. 突变型人源乙酰胆碱神经受体α7的构建表达纯化[J]. 药物生物技术,2016,23(02):95-98. |
| APA | 张斯维,程浩,&王旻.(2016).突变型人源乙酰胆碱神经受体α7的构建表达纯化.药物生物技术,23(02),95-98. |
| MLA | 张斯维,et al."突变型人源乙酰胆碱神经受体α7的构建表达纯化".药物生物技术 23.02(2016):95-98. |
入库方式： OAI收割
来源：上海药物研究所
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