基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立
文献类型：期刊论文
| 作者 | 孙冰洁; 陈示洁; 邓龙飞; 丁晨虹; 陈斐; 罗成 ; 谢渭芬; 张新
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| 刊名 | 第二军医大学学报
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| 出版日期 | 2017-09-20 |
| 卷号 | 38期号:09页码:1112-1118 |
| 关键词 | 肝细胞核因子4α Ninjurin 1 报告基因系统 小分子化合物 |
| 文献子类 | Article |
| 英文摘要 | 目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。 |
| 资助项目 | 上海市科学技术委员会生物医药领域科技支撑项目[15421907700] |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/269429]  |
| 专题 | 药物发现与设计中心 |
| 作者单位 | 中国科学院上海药物研究所,药物发现与设计中心,上海 201203, 中国. |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 孙冰洁,陈示洁,邓龙飞,等. 基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立[J]. 第二军医大学学报,2017,38(09):1112-1118. |
| APA | 孙冰洁.,陈示洁.,邓龙飞.,丁晨虹.,陈斐.,...&张新.(2017).基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立.第二军医大学学报,38(09),1112-1118. |
| MLA | 孙冰洁,et al."基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立".第二军医大学学报 38.09(2017):1112-1118. |
入库方式： OAI收割
来源：上海药物研究所
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