新型VEGFR选择性抑制剂DW10075的抗肿瘤与抗新生血管生成作用研究
文献类型：会议论文
| 作者 | 李梦园; 吕永聪; 童林江1; 瞿戎; 魏立新; 段文虎2 ; 谢华1; 丁健1
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| 出版日期 | 2015-04-24 |
| 关键词 | VEGFR 磷酸化 DW10075 新生血管生成 抑制剂 浮选药剂 HUVEC 抗肿瘤 抑制活性 |
| 页码 | 2 |
| 英文摘要 | 目的化合物DW10075为靶向设计合成的潜在VEGFR抑制剂,为新结构苯胺嘧啶萘酰胺类衍生物。本课题开展DW10075的靶点抑制活性、新生血管生成抑制活性和体内、外抗肿瘤活性检测,深入研究其抗肿瘤作用机制。方法首先采用酶联免疫吸附试验(ELISA),研究DW10075对多种酪氨酸激酶的抑制作用,确定其VEGFR激酶抑制活性及其选择性。然后,在人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)中,采用磺酰罗丹明B(SRB)方法和Western Blot方法,分别检测DW10075对不同生长因子刺激下HUVEC细胞的增殖抑制作用,以及对VEGF刺激引起的VEGFR-2活化以及下游通路的抑制作用。进而,分别采用HUVEC细胞管腔形成实验、迁移实验,大鼠动脉环模型和鸡胚尿囊膜模型(CAM),检测DW10075的抗新生血管生成活性。此外,检测了DW10075对20余株肿瘤细胞的体外增殖抑制活性,并选择U87-MG裸小鼠移植瘤模型,检测DW10075的体内抗肿瘤生长作用,并采用免疫组化方法检测其对瘤组织内血管和肿瘤增殖的影响。结果首先应用ELISA法,在分子水平研究了DW10075对包括VEGFR家族激酶在内的21种酪氨酸激酶的抑制活性,结果表明DW10075对VEGFR-2具有选择性抑制作用,其IC_(50)为0.7±0.3 nM,强于目前广泛研究的阳性对照药Pazopanib(30±0.5 nM),而对VEGFR-1的抑制活性较VEGFR2弱一个数量级(IC_(50)6.4±0.4nM),对VEGFR-3抑制较弱(IC_(50)5.5±1.2 nM);此外,对于与VEGFR激酶同源性较高的PDGFR-α、FGFR1和FGFR2,以及其他测试激酶没有显著抑制活性,(IC_(50)分别>10000 nM nM)。以上结果提示,DW10075为新结构、高选择性VEGFR酪氨酸激酶抑制剂。进而我们选择VEGFR-2高表达的HUVEC细胞,检测DW10075对不同生长因子刺激下HUVEC细胞的增殖抑制作用,结果显示DW10075选择性抑制VEGF诱导的HUVEC细胞增殖,对血清和其他生长因子(如FGF,PDGF)抑制活性弱。Western blot结果表明,DW 10075浓度依赖性抑制VEGF诱导的VEGFR-2的磷酸化及其下游信号分子Erk1/2的磷酸化;与相同浓度的Sunitinib相比,DW10075对VEGFR-2的抑制作用更强。结果表明DW10075有效抑制HUVEC细胞中VEGFR2的磷酸化及其下游信号转导通路的活化,从而抑制VEGF诱导的HUVEC细胞体外增殖。由于VEGFR与肿瘤新生血管生成密切相关,也是抗肿瘤血管新生研究中非常重要的抗肿瘤靶点,因此,我们进一步检测化合物DW10075的抗新生血管生成活性。两种体外模型——HUVEC细胞迁移实验(Migration Assay)和管腔形成实验(Transwell Assay)结果显示:DW10075可浓度依赖性地抑制HUVEC细胞的迁移能力,以及管腔形成能力,在10 nM浓度时即具有明显的抑制作用。两种半体内或体内模型——动脉环模型和CAM模型的研究显示类似结果:DW10075具有强效抑制新生血管生成能力。以上结果表明DW10075具有强效体外、体内抗新生血管生成作用。接下来我们检测了DW10075对22种不同来源的肿瘤细胞体外增殖抑制活性,结果显示DW10075具有广谱增殖抑制活性,其中对U87-MG人神经胶质瘤细胞抑制活性最为显著,IC50为2.3±0.2 mM。由于神经胶质瘤为血管丰富的肿瘤,且U87-MG对DW10075最为敏感,因此我们选用M87-MG裸小鼠移植瘤模型进一步验证DW10075的体内肿瘤抑制生长作用。结果显示,DW10075在500 mg/kg的给药剂量下,有效抑制肿瘤的增殖(P<0.05);同时动物耐受好,无显著体重减轻。此外,瘤组织免疫组化结果显示DW10075治疗组中,CD31和Ki67显著下降。结果提示DW10075有效抑制肿瘤增殖及瘤组织内血管生成,从而有效抑制U87-MG移植瘤的生长。结论本研究结果表明DW10075为强效、全新结构VEGFR抑制剂,具有显著的抗新生血管生成作用,和良好体外、体内抗肿瘤活性。本研究为DW10075作为抗肿瘤候选化合物的进一步研发奠定了基础,同时也丰富了苯胺嘧啶萘酰胺类化合物的研究内容,为该类化合物的结构修饰提供了新的理论依据。 |
| 会议录 | 2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议摘要汇编
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| 文献子类 | Article |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267085]  |
| 专题 | 药理学第一研究室 药物化学研究室 |
| 作者单位 | 1.中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.; 2.中国科学院上海药物研究所,药物化学研究室,上海 201203, 中国. |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李梦园,吕永聪,童林江,等. 新型VEGFR选择性抑制剂DW10075的抗肿瘤与抗新生血管生成作用研究[C]. 见:. |
入库方式： OAI收割
来源：上海药物研究所
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