受体酪氨酸激酶Eph家族的激酶区表达
文献类型：会议论文
| 作者 | 张潇炜; 谢华1 ; 林莉萍2; 丁健1
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| 出版日期 | 2007-06-01 |
| 关键词 | 受体酪氨酸激酶 Eph 家族 |
| 页码 | 1 |
| 英文摘要 | 目的:Eph 家族是受体酪氨酸激酶中最大的一个家族,有 A B 两个亚族共16个成员。原来对 Eph 家族的研究偏重于其在发育过程中诱导神经生长锥的方向,血管内皮细胞分化等方面,现逐渐认识到其在肿瘤的发展过程中也有重要作用。我们拟通过表达 Eph 家族中几个不同成员的激酶区,获得具有激酶功能的蛋白,建立此类激酶抑制剂的筛选模型,进一步对此类激酶在肿瘤发展过程中的生物学功能进行研究。方法:用 PCR 的方法扩增出 Eph 家族中 EphA2、EphB2和 EphB4的激酶区,装入 pFastBac 昆虫表达系统的载体中,重组出能在昆虫细胞中产生病毒的杆粒,将病毒收集并感染昆虫细胞,裂解细胞,利用 Ni-NTA 亲和柱进行亲和纯化,获得目的蛋白,利用 Western Blot 方法鉴定目的蛋白的纯度。利用 ELISA 的方法优化了反应条件,鉴定了蛋白活性。结果:纯化后获得的蛋白分子量都在40kD 左右。ELISA 反应条件终浓度为:HEPES 50mM,MgCl_220mM,MnCl_2 0．1mM,Na_3VO_4 0．2mM,DTT 1mM, ATP 5μM,96孔板中每孔加入0．1μL 酶溶液。结论:表达获得的目的蛋白具有酶活性,此模型可用于抑制剂筛选,有望找到新的 Eph 家族激酶抑制剂。 |
| 会议录 | 2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集
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| 文献子类 | Article |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267510]  |
| 专题 | 药理学第一研究室 科研与新药推进处 |
| 作者单位 | 1.中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.; 2.中国科学院上海药物研究所,科研与新药推进处,上海 201203, 中国. |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张潇炜,谢华,林莉萍,等. 受体酪氨酸激酶Eph家族的激酶区表达[C]. 见:. |
入库方式： OAI收割
来源：上海药物研究所
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