微藻具有光能利用效率高，生长快，高附加值物质含量高等特性，因此微藻资源的开发利用是获得天然蛋白、色素、药物和生物燃料的理想途径。此外，根据微藻利用营养物质固定CO₂的特性，还可以实现工业烟气中的二氧化碳及城市废水中氮磷化合物的减排。大规模持续性养殖的实现是开发利用微藻资源的前提。但是在户外，敌害生物污染是微藻大规模培养过程的限制因素之一。其中以浮游动物污染较为严重且普遍，轻者可抑制微藻生长，延长培养周期，重者会导致微藻绝收。然而，针对微藻大规模培养过程中的敌害生物污染目前尚无有效的防治方法。本论文选取敌害生物典型代表——轮虫和棘尾虫为实验对象，（1）探讨敌害生物除直接摄食微藻细胞外，通过分泌未知物质抑制微藻生长的机制，并对敌害生物分泌物的成分进行初步解析；（2）以植物源杀虫剂川楝素和苦皮藤素为例，探讨其在敌害生物污染治理中的应用效果和经济可行性，以期为微藻规模化培养中敌害生物的早期检测和防治提供理论和技术指导。

1. 研究了不同浓度轮虫分泌物对小球藻生长的影响。结果表明在新鲜培养基中添加无菌轮虫培养滤液（RCF，含轮虫分泌物）显著降低了小球藻的细胞密度，且培养基中RCF的占比（5%，10%，20% 和30%）越高小球藻的细胞密度越低。同时，不同初始细胞密度（1.4×10⁶ cells mL⁻¹、4.2×10⁶ cells mL⁻¹、7.8×10⁶ cells mL⁻¹和18.0×10⁶ cells mL⁻¹）的小球藻对10% RCF的响应也不同。增加小球藻的初始细胞密度会使10% RCF中定量的抑制性化学物质分散到更多的细胞上，从而减弱每个细胞所受的抑制作用，但随着时间增加总体抑制效果不变。说明轮虫释放的化学物质对微藻细胞生长的抑制作用与培养基中RCF浓度和小球藻暴露在其中的时间有关。同时，培养液中10%以上的RCF显著抑制了小球藻的光合作用和呼吸作用，且抑制率与RCF在培养基中的占比呈正相关。说明轮虫分泌物可以通过抑制小球藻光合作用和呼吸作用抑制其生长。同时根据已获得的结果，我们经统计计算可知，每只轮虫每小时除捕食外，释放的化学物质可以抑制45.5±3.2个小球藻细胞的生长。
2. 为了确定轮虫分泌物中抑制物质的化学本质和作用机理，本实验研究了小球藻对轮虫分泌物中不同组分的响应。结果表明煮沸RCF并不能消除其对小球藻生长的抑制作用，说明轮虫分泌物中的抑制物质不是蛋白或类蛋白。RCF中水溶性组分不会对小球藻的生长和净光合放氧速率造成抑制，但RCF中脂溶性组分显著抑制了小球藻的光系统II（PSII）活性，降低了光合电子传递速率和光合放氧速率，导致其生长速率显著下降。根据小球藻细胞的以上生理变化情况，判定RCF中的主要抑制物为脂溶性物质，非蛋白和水溶性物质。同时根据各项指标变化，我们推测，该脂溶性抑制物可能是游离脂肪酸或由不饱和脂肪酸光氧化衍生的物质。
3. 为了进一步解析轮虫脂溶性分泌物对小球藻的抑制机理，本实验对不同浓度（10% 和30%）RCF脂溶性抑制物作用下小球藻的抗氧化系统进行了研究。结果表明，低浓度抑制物（10%）作用下，小球藻超氧阴离子自由基（O₂^-）、羟自由基（·OH）和过氧化氢（H₂O₂）含量均有所升高，细胞受到过氧化伤害，同时，抗氧化系统相关酶，超氧物歧化酶（SOD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和愈创木酚过氧化物酶（POD）活性均呈上升趋势，羟自由基清除能力（HFRSC）加强，还原型谷胱甘肽（GSH）水平提高，过氧化氢酶（CAT）活性不变，说明小球藻试图通过提高自身抗氧化能力来抵抗细胞内活性氧的积累。而高浓度RCF脂溶性抑制物（30%）极大地抑制了抗氧化系统相关酶APX、POD，CAT活性和HFRSC。活性氧O₂^-和·OH含量均显著上升，说明高浓度RCF脂溶性抑制物使小球藻细胞产生大量活性氧，引起氧化胁迫，细胞内发生脂质过氧化作用，细胞结构被破坏，生长受到抑制。
4. 为了寻找到有效治理微藻规模化培养中轮虫污染的方法，本实验研究了轮虫抑制微拟球藻生长的机制及植物源杀虫剂苦皮藤素（CA）：川楝素（TSN）（1:9）复配剂对轮虫的杀灭效果。结果表明，褶皱臂尾轮虫可直接吞噬微拟球藻细胞，导致藻细胞密度急剧下降。同时，轮虫污染也破坏了剩余微拟球藻PSII反应中心、光合电子受体侧和供体侧，导致光能吸收和利用的失衡，更容易引起氧化胁迫。而CA:TSN（1:9）复配剂可以阻止褶皱臂尾轮虫吞噬微拟球藻细胞，同时保护微拟球藻细胞的光合电子传递链，保证其正常生长。说明植物源杀虫剂复配剂CA:TSN（1:9）是一种很好的控制轮虫污染的选择。
5. 本实验选取微藻培养中另一种常见污染源—棘尾虫为研究对象，对比研究了川楝素和碳酸氢铵对棘尾虫的毒性作用。毒性试验表明，川楝素和碳酸氢铵对棘尾虫均为高毒性，24小时的致死中浓度（LC₅₀）分别为6.4 μg L^-1和0.8 g L^-1。当棘尾虫暴露于 ≥ 2 μg L^-1的川楝素或 ≥ 0.4 g L^-1的碳酸氢铵时，棘尾虫种群密度显著降低。此外，川楝素和碳酸氢铵对小球藻的防治效果及其安全性评价表明，14 μg L^-1的川楝素对小球藻光合作用和生长没有明显的毒害作用，与对照组相比，川楝素不仅有效地降低了棘尾虫密度，还促进了小球藻的生长。而 ≥ 0.8 g L^-1碳酸氢铵会抑制小球藻的生长和光合作用，导致微藻细胞密度下降 ≥ 5.1%。说明川楝素对棘尾虫具有高毒性，但对小球藻安全无毒，是一种很好的控制棘尾虫污染的选择。

综合以上实验结果，我们推测轮虫释放的脂溶性抑制物可能是游离脂肪酸或由不饱和脂肪酸光氧化衍生的物质。该物质通过破坏微藻细胞的光合电子传递链，导致光能吸收和利用的失衡，造成电子泄漏，产生大量活性氧，引起氧化胁迫，对质膜造成严重损伤从而使藻细胞破裂。而植物源杀虫剂川楝素和苦皮藤素在能够有效控制微藻培养过程中的轮虫和棘尾虫污染，且具有经济可行性。深入了解敌害生物对微藻细胞的毒性作用，有助于调整污染防控方案，优化藻类培养的生产力。除此之外，低成本、环境友好、使用方便的治理轮虫和棘尾虫污染的方法，可为微藻规模化培养中敌害生物防治提供理论和技术指导。