虹彩病毒SGIV依赖石斑鱼网格蛋白及微管侵染宿主细胞的机制研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 王立群 |
| 答辩日期 | 2019 |
| 授予单位 | 南海海洋研究所 |
| 导师 | 秦启伟,何毛贤 |
| 关键词 | 石斑鱼虹彩病毒(SGIV)，单粒子示踪技术，网格蛋白轻链，微管，病毒侵染 |
| 学位名称 | 硕士 |
| 学位专业 | 海洋生物学 |
| 其他题名 | The effects of clathrin and microtubule on Singapore grouper iridovirus infection in the host cells of grouper, Epinephelus akaara |
| 英文摘要 | 石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus，SGIV)为虹彩病毒科、蛙病毒属的一个新种，是海水养殖鱼类重要的病毒性病原，严重危害海水养殖业的可持续健康发展。本文应用单粒子示踪技术、过表达显性负性突变体等方法，探讨了SGIV利用石斑鱼网格蛋白轻链(clathrin light chain，CLC)和微管侵染宿主细胞的机制，取得了以下创新性研究成果。 1、本文从赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)中克隆了石斑鱼网格蛋白轻链基因EaCLCa和EaCLCb。EaCLCa开放阅读框(open reading frame, ORF)全长609 bp，编码202个氨基酸，与斜带石斑鱼(E. coioides)具有99%的同源性。EaCLCb ORF全长618 bp，编码205个氨基酸，与雀鲷(Stegastes partitus)具有92%的同源性。EaCLCa和EaCLCb均具有CON、Ca2+、HC、Cam等结构域。EaCLCa和EaCLCb在各个组织中均有分布，并且EaCLCa的转录水平高于EaCLCb。亚细胞定位表明，EaCLCa和EaCLCb分布于细胞质和细胞膜上，并具有明显共定位。通过结构域分析和氨基酸序列比对，找到EaCLCa和EaCLCb与网格蛋白重链(clathrin heavy chain, CHC)结合的关键位点，分别构建EaCLCa和EaCLCb的突变体EaCLCa-W119R和EaCLCb-W122R，破坏轻链与重链的结合，进而探究EaCLCa和EaCLCb在虹彩病毒感染过程中的作用。研究结果表明，破坏EaCLCa显著降低SGIV在宿主细胞的感染强度，而破坏EaCLCb对病毒感染无显著影响。应用单粒子成像技术等方法，进一步探究EaCLCa和EaCLCb影响病毒感染的关键事件。结果显示，破坏EaCLCa会显著抑制SGIV病毒粒子的进入，但不影响病毒的黏附；显著减少SGIV与Rab5的共定位，影响SGIV向早期内体的运输；显著降低SGIV与微丝的共定位。然而，破坏EaCLCb对SGIV的黏附、进入以及与Rab5、微丝的共定位均无显著影响。此外，在SGIV感染晚期观察到EaCLCa和EaCLCb均围绕在病毒加工厂附近，表明EaCLCa和EaCLCb可能参与病毒感染晚期阶段的事件。2、应用单粒子示踪技术实时追踪SGIV病毒粒子沿微管运动的行为，观察到SGIV在细胞边缘至微管组织中心(microtubule-organizing center，MTOC)之间双向运动，最高瞬时速度约0.2 μm/s，表现为主动运输。病毒粒子运动至微管交叉位置会减速迂回，而后或受限于此，平均运动速率约0.008 μm/s，或通过交叉处继续快速运动，最高瞬时速度为0.2 μm/s。同时，SGIV感染会影响微管的形态结构，随着SGIV感染，微管逐渐围绕细胞核或病毒加工厂形成环状结构。本研究通过单粒子示踪技术并结合生物化学等方法，分析了EaCLCa和EaCLCb对虹彩病毒感染的不同影响，并实时追踪和分析了SGIV依赖微管运动的行为特征，初步揭示了SGIV与网格蛋白和微管之间相互作用的复杂过程，有助于深入理解海水鱼类虹彩病毒的感染和致病机理。 |
| 源URL | [http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/18094]  |
| 专题 | 南海海洋研究所_学位论文（硕士） |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王立群. 虹彩病毒SGIV依赖石斑鱼网格蛋白及微管侵染宿主细胞的机制研究[D]. 南海海洋研究所. 2019. |
入库方式： OAI收割
来源：南海海洋研究所
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