骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定
文献类型：期刊论文
| 作者 | 胡明; 朱通; 余志平; 李周全; 范校周; 郭燕丽; 江军; 王洛夫 |
| 刊名 | 第三军医大学学报
 |
| 出版日期 | 2017 |
| 卷号 | 39期号:06页码:541 |
| 关键词 | 纳米抗体 肾癌相关抗原G250 噬菌体展示 骆驼 |
| ISSN号 | 1000-5404 |
| 英文摘要 | 目的制备能与肾癌相关抗原G250胞外区特异性结合的纳米抗体。方法通过瞬时转染方式将包含G250蛋白胞外区基因片段的质粒导入到真核细胞HEK 293F中表达G250胞外区,以该重组蛋白免疫新疆双峰驼,构建噬菌体展示纳米抗体库。通过体外定向筛选,得到能与G250蛋白胞外区特异性结合的噬菌体,以Monoclonal phage ELISA方法筛选出具有结合活性的噬菌体克隆。通过细胞ELISA和流式细胞仪再次验证淘选到的纳米抗体的细胞结合活性。结果测序证明编码G250的重组DNA片段序列正确, Western blot检测结果证实G250重组蛋白成功表达。通过免疫新疆双峰驼,成功构建了库容为2.87×10~9的噬菌体展示骆驼VHH免疫文库。在体外对免疫纳米抗体库进行3轮固相筛选,使具有结合活性的噬菌体克隆得到了有效富集,阳性率高达54.3%。经过抗原ELISA、细胞ELISA鉴定,筛选出3个具有细胞结合活性的纳米抗体噬菌体克隆,取其中结合活性最高的Nb-G5进行表达、纯化,产量为1.5 mg/L培养物,流式细胞仪检测结果证实Nb-G5与G250表达阳性的细胞具有很强的特异性结合能力。结论从纳米抗体库中淘选得到了在分子和细胞水平均能与G250蛋白胞外区特异性结合的纳米抗体。 |
| 语种 | 英语 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/37905]  |
| 专题 | 水生生物研究所_其他_期刊论文 |
| 作者单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 胡明,朱通,余志平,等. 骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定[J]. 第三军医大学学报,2017,39(06):541. |
| APA | 胡明.,朱通.,余志平.,李周全.,范校周.,...&王洛夫.(2017).骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定.第三军医大学学报,39(06),541. |
| MLA | 胡明,et al."骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定".第三军医大学学报 39.06(2017):541. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。