鲫鳍细胞的原、传代培养与水生动物细胞对蛙病毒敏感性的分析
文献类型：学位论文
| 作者 | 雷存科 |
| 答辩日期 | 2018 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 导师 | 张奇亚 |
| 英文摘要 | 细胞培养目前仍然是病毒学研究基本和必备的方法。水生动物细胞可用于病毒的分离、鉴定、敏感性测定、抗病毒药物筛选和病毒基因功能分析。因此，本文针对鲫鳍细胞原代、传代培养及冻存；不同病毒对水生动物细胞敏感性的分析等进行研究。主要研究内容如下：1. 鲫鳍细胞的原、传代培养。对鲫鳍条组织进行原代、传代培养。第7天就有鲫鳍细胞从组织块附近迁出并贴于细胞培养瓶的壁上，自2016年4月到目前为止，鲫鳍细胞已传代60代以上，原始的单层细胞在一个月后形成，形态不均一。20代后，传代的鲫鳍细胞呈上皮状，第3天可形成单层细胞。其最适生长条件为含10%血清的M199培养基于25 ℃ 条件下培养。2. 水生动物细胞对蛙病毒敏感性的分析。利用3个不同物种的水生动物细胞系，包括爪蟾肾细胞（Xenopus kidney cell line, A6）、大鲵胸腺细胞系（Chinese giant salamander thymus cell line, GSTC）和鲤鱼上皮瘤细胞系（Epithelioma papulosum cyprini cell line, EPC），分别对沼泽绿牛蛙蛙病毒（Rana grylio virus, RGV）和大鲵蛙病毒（Andriasda davidianus ranavirus, ADRV）的感染结果，包括细胞病变显微形态、病毒滴度、细胞病变与不同感染时间的相关性等。显示，在光镜下可见感染病毒的细胞发生病变，A6 和 EPC 细胞肿胀或破裂；GSTC 细胞收缩或聚在一起形成多层。结果还显示同种水产动物细胞系对不同蛙病毒的敏感性不同，在A6, EPC 和 GSTC细胞中，RGV的滴度分别为103.6、105.9 和 106.6 TCID50/mL；ADRV的滴度分别为104.3、105.4 和106.1 TCID50/mL，表明GSTC细胞系对两种蛙病毒都更敏感。研究为后续蛙病毒致病机理提供有用的信息和重要实验材料。3. 重组蛙病毒Δ12L-ADRV的构建。通过荧光标签共进行十一轮挑斑筛选，获得将ADRV 12L替换为p50-EGFP的重组蛙病毒Δ12L-ADRV。一步生长曲线结果表明野生型和重组病毒的滴度在感染后24小时无明显差异；而在36-48小时重组病毒滴度显著低于野生型，空斑实验显示重组病毒形成空斑变小。 |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/39078]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 雷存科. 鲫鳍细胞的原、传代培养与水生动物细胞对蛙病毒敏感性的分析[D]. 中国科学院水生生物研究所. 2018. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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