铁皮石斛多糖合成相关基因的克隆
文献类型：会议论文
| 作者 | 何春梅; 张建霞; 王聪; 吴坤林; 曾宋君; 段俊 |
| 出版日期 | 2013 |
| 会议日期 | 2013-10-13 |
| 会议地点 | 江西南昌 |
| 关键词 | 多糖 基因克隆 PMM GMPase 甘露糖糖基转移酶基因 |
| 页码 | 101-102 |
| 国家 | 中国 |
| 英文摘要 | 铁皮石斛（Dendrobium）是我国传统名贵的中药材之一,据《中国药典2010》记载,铁皮石斛具有益胃生津,滋阴清热等功效。铁皮石斛多糖是其主要的药效成份之一。石斛中的多糖主要为葡甘露聚糖,1988年,王世林等从铁皮石斛（Dendrobiumofficinale）中分离提取到三种β型的葡甘露聚糖;Hsieh等从霍山石斛（Dendrobiumhuoshanense）中分离到的β-1,4-葡甘露聚糖具有提高细胞因子转录水平的作用。为了解铁皮石斛多糖生物合成的机制,本研究以铁皮石斛茎段为材料,采用RT-PCR及RACE法克隆铁皮石斛多糖合成代谢途径中的磷酸甘露糖酶（phosphomannomutase;PMM）基因、GDP-甘露糖焦磷酸化酶（GDP-Mannose pyrophosphorylase;GMPase）基因以及β型甘露糖糖基转移酶（4-beta-Mannosyl-transferase）基因。GDP-Mannose是甘露糖的一种活化形式,直接为多糖的合成提供单糖。磷酸甘露糖酶（PMM）是一种双功能酶,催化D-Mannose-6-phosphate和D-Mannose-1-phosphate之间的互变,为下一步合成GDP-Mannose提供底物。克隆的PMM基因cDNA包括126bp的5’非编码区（Untranslatedregion,UTR）,184bp的3’（Untranslatedregion,UTR）非编码区和759bp的开放阅读框（ORF）,编码一个253个氨基酸的蛋白,分子量为28.617kD,理论等电点为5.90,与水稻OsPMM蛋白具有85%的相似性,与拟南芥的AtPMM蛋白具有77%的相似性。采用WoLFPSORT和BaCelLo生物在线软件对DoPMM蛋白的亚细胞定位预测,分析结果显示DoPMM定位在细胞质中,TMHMM软件分析没有跨膜区域。克隆了GMPase-1和GMPase-2两个GDP-Mannose焦磷酸酸化酶（GMPase）基因,其中GMPase-1基因的cDNA包括186bp的5’非编码区（UTR）,257bp的3’非编码区（UTR）和1086bp的开放阅读框（ORF）,编码一个362个氨基酸的蛋白,分子量为39.373kD,理论等电点为6.62;GMPase-2基因的cDNA包括11bp的5’非编码区（UTR）11bp,224bp的3’非编码区（UTR）和1248bp的开放阅读框（ORF）,编码一个416个氨基酸的蛋白,分子量为45.875kD,理论等电点为6.44。GDP-Mannose焦磷酸酸化酶（GMPase）以D-Mannose-1-phosphate为底物,催化生产甘露糖的活化形式GDP-Mannose,为多糖的合成提底物。GMPase-1和GMPase-2蛋白进行TMHMM软件分析都没有发现跨膜区域。β型甘露糖糖基转移酶（4-beta-mannosyltransferase）主要参与β型的甘露聚糖的合成,以GDP-Mannose为底物,将甘露糖转移到糖链上。其cDNA包括392bp的5’非编码区（Untranslated region,UTR）,482bp的3’非编码区（Untranslated region,UTR）和1611bp的开放阅读框（ORF）,编码一个537个氨基酸的蛋白,分子量为61.168kD,理论等电点为9.11。TMHMM软件进行跨膜分析时,发现该基因编码的蛋白具有五个跨膜区域,这五个跨膜区域分别在50～72位氨基酸,365～387位氨基酸,407～429位氨基酸,487～506位氨基酸,511～533位氨基酸。在获得上述基因的全长后,我们将进一步研究其功能,为了解铁皮石斛多糖代谢途径打下基础。 |
| 会议录 | 生态文明建设中的植物学：现在与未来——中国植物学会第十五届会员代表大会暨八十周年学术年会论文集——第1分会场：系统与进化植物学
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| 语种 | 中文 |
| URL标识 | 查看原文 |
| 源URL | [http://210.77.82.179/handle/2SCSIERX/4001]  |
| 专题 | 研究领域 |
| 作者单位 | 中国科学院华南植物园 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 何春梅,张建霞,王聪,等. 铁皮石斛多糖合成相关基因的克隆[C]. 见:. 江西南昌. 2013-10-13. |
入库方式： OAI收割
来源：华南植物园
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