盐生杜氏藻（Dunaliella salina）是一种广盐性的单细胞、双鞭毛真核绿藻。在强光、高盐等胁迫条件下，能大量累积β-胡萝卜素，是目前天然β-胡萝卜素最佳来源。同时，盐生杜氏藻还含有丰富的蛋白质、甘油、多不饱和脂肪酸、维生素和矿物质等物质，具有广阔的应用前景。目前规模化培养盐藻生产β-胡萝卜素，主要采用二步串联法在自然浅塘（澳大利亚）或人工跑道池（以色列、中国、伊朗、印度等）中实现，即首先在适宜绿色盐藻细胞生长条件下，大量生产生物质或藻细胞，然后转入高盐度海水中，在自然强光、高温下大量积累β-胡萝卜素。理论上，高盐、强光是细胞大量积累β-胡萝卜素的必要条件；但从第一阶段向第二阶段转移时，已经适应温和条件的盐藻绿色细胞极易面对自然强光、介质盐度剧升等胁迫条件，发生光抑制甚至光氧化，导致藻细胞损伤甚至大量死亡，成为实现大规模培养盐生杜氏藻生产β-胡萝卜素的限制因素。高盐是否会加剧强光胁迫，是否有方法既能缓解可能存在的双重胁迫，又能维持较高的β-胡萝卜素产出尚不清楚。

本论文以盐生杜氏藻（IOCAS 879ss）为实验藻株，围绕其生长阶段和盐藻由生长阶段向β-胡萝卜素积累阶段的过渡阶段，开展了如下研究：首先，筛选出适宜盐藻生长的盐度、光照强度和温度范围，通过正交试验方法研究盐度、光照强度和温度对盐藻生长的交互作用影响，对比研究了盐藻比生长速率、色素含量、呼吸耗氧速率、光合放氧速率和叶绿素荧光参数的变化，并通过活体叶绿素荧光等方法挖掘各单因素或两因素交互作用的光合生理机制；其次，针对盐藻从生长阶段向β-胡萝卜素积累阶段转移时的盐度变化，利用快速光曲线分析不同盐度变化下的盐藻对光照的需求，对比研究了不同盐度梯度变化对盐藻生长、藻细胞光合能力、光强适应性等方面的差异，为明确不同程度盐度变化时，人工调节设置光照强度提供数据支撑；同时，通过添加有机碳源甘油和醋酸钠，探究盐藻在高光高盐条件下的细胞密度、色素含量、呼吸耗氧速率、光合放氧速率以及叶绿素荧光等参数的变化，对比研究了甘油和醋酸钠在高光高盐条件下分别对盐藻生长和色素积累的影响，并结合光合生理参数初步探究了最优碳源对盐藻生长的影响机制，验证有机物添加的作用效果。

主要结果如下：

1. 在生长阶段，藻细胞最大比生长速率是0.36 d^-1；盐度、光照强度和温度三因素对盐藻比生长速率的影响次序为温度＞盐度＞光照；最适合藻细胞增殖的条件为：盐度110、光照强度120 μmol·m^-2·s^-1、温度30℃。通过盐度、光照和温度交互作用的二元图分析发现，当盐度为160时，温度从20℃上升到30℃时，藻细胞的比生长速率增幅为0.12 d^-1，而盐度为110时，增幅为0.17 d^-1。同样的，光强为50 μmol·m^-2·s^-1时，藻细胞的比生长速率增幅为0.14 d^-1，光强为120 μmol·m^-2·s^-1时，增幅为0.17 d^-1，说明盐度与温度、光照与温度对藻细胞增殖存在交互作用。

2. 培养基盐度由110增加至160，盐藻叶绿素含量和类胡萝卜素含量分别增加了12.4%和12.6%，比生长速率增长了56.5%。不同盐度梯度变化实验结果显示：盐藻从NaCl终含量为80 g/L的培养基转移到NaCl终含量分别为160、240和320 g/L的培养基中，短期内藻细胞生长均受抑制。从80 g/L分别转移到240 g/L和320 g/L NaCl浓度的培养基中，藻细胞停止生长。随着培养时间的延长，NaCl终含量为160 g/L的类胡萝卜素总产量最高。这表明相对低盐度有利于藻细胞的快速增殖，相对高盐度有利于类胡萝卜素的积累，因此，若以快速获取藻细胞密度为目的，应选择盐度110，若以获取生物量为培养目的，盐度提升至160为宜。

3. 快速光曲线拟合结果显示，盐度梯度变化越大，藻细胞对光照的需求量越低。盐藻可以通过热耗散的形式来耗散掉多余的能量从而有效地应对盐度从80到160 g/L的突然上升。而当培养基盐度从80 g/L骤升到240，320 g/L时，由于Q_A^-的过度积累，PSII受体侧受到破坏，导致光合电子传递受到抑制。藻细胞通过β-胡萝卜素积累、热耗散等机制来应对盐度从80骤升到240 g/L。但由于盐藻受到非常强的光抑制以及其PSII受体侧的损伤，盐藻不能应对由80骤升到320 g/L的盐度变化从而导致藻细胞大批量死亡。因此，在瞬时盐度变化过程中，需要给藻细胞进行适当的遮光处理。当盐度从80 g/L NaCl骤升至160 g/L NaCl和240 g/L NaCl时，短期遮光至800 μmol·m^-2·s^-1和500 μmol·m^-2·s^-1比较合适。

4. 在培养过程中添加外源醋酸钠，可以有效缓解强光对藻细胞产生的光抑制，促进藻细胞的增殖和类胡萝卜素的积累。其中2 g/L醋酸钠对藻细胞增殖的效果最好，添加1 g/L醋酸钠可以有效促进藻细胞类胡萝卜素的积累。添加醋酸钠抑制了藻细胞的光合活性和总光合放氧速率，但明显促进了藻细胞的呼吸耗氧速率，推测醋酸钠可能是通过生成乙酰辅酶A增加了糖代谢途径中代谢物的通量从而促进了β-胡萝卜素的合成。在光照强度为240 μmol·m^-2·s^-1的条件下，添加1 g/L的外源醋酸钠，对照组藻细胞F_v/F_m值下降了26%，而添加醋酸钠组的降幅仅为2.4%，说明添加外源醋酸钠后有效的缓解了强光对藻细胞产生的光抑制。同时醋酸钠组的非光化学淬灭（NPQ）显著升高，说明醋酸钠是通过NPQ的构建将多余的光能以热耗散的形式耗散掉，从而保护了藻细胞的光合机构。

综上所述，盐度、光照和温度三因素对盐藻的生长存在交互作用，低盐度（110）有利于盐藻的增殖，高盐度（160）有利于盐藻类胡萝卜素的积累。且在培养过程中添加醋酸钠可以有效的促进盐藻细胞的生长和类胡萝卜素的积累，醋酸钠主要通过提高呼吸作用促进β-胡萝卜素的积累，且醋酸钠可以通过构建NPQ有效缓解强光对藻细胞产生的光抑制。