人细胞周期蛋白D1／CDK4基因的真核表达及生物活性鉴定
文献类型：期刊论文
| 作者 | 王鸿鹤2; 朱孝峰2; 谢冰芬2; 冯公侃2; 沈竞康1; 刘宗潮2 |
| 刊名 | 中国生物化学与分子生物学报
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| 出版日期 | 2003 |
| 卷号 | 19.0期号:006页码:709 |
| 关键词 | 细胞周期蛋白D1 昆虫杆状病毒表达系统 分子靶点 真核表达 基因表达 生物活性 |
| ISSN号 | 1007-7626 |
| 英文摘要 | 通过生物工程获得人重组细胞周期蛋白(cyclin D1)及细胞周期蛋白激酶CDK4蛋白，作为抗癌药物筛选的分子靶点．从人HL-60细胞中获得细胞周期蛋白D1／CDK4基因的cDNA，先克隆至pGEM T-Easy载体上，再经重组构建供体质粒pFastBac-D1和pFastBac-CDK4．重组供体质粒转化感受态DHl0Bac细胞，挑取确证为白色克隆的菌落振荡培养，分离制备高纯度杆粒DNA．以重组病毒适量感染昆虫细胞Tn-5B1-4，利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞Tn-5B1-4(Hi5)中表达相应的重组蛋白、应用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)在昆虫细胞Tn-5B1-4中分别高效表达了人细胞周期蛋白D1和CDK4蛋白．SDS-PAGE分析表明，表达量占细胞可溶性蛋白质的20％左右，表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后纯度达85％以上．研究表明，昆虫细胞表达的细胞周期蛋白D1和CDK4蛋白能促进Rb蛋白的磷酸化，具有生物活性．成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4真核杆状病毒表达载体，并且在昆虫细胞中正确表达了具有生物活性的细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白． |
| 语种 | 英语 |
| 源URL | [http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/293601]  |
| 专题 | 中国科学院上海药物研究所 |
| 作者单位 | 1.中国科学院上海药物研究所 2.中山大学 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王鸿鹤,朱孝峰,谢冰芬,等. 人细胞周期蛋白D1／CDK4基因的真核表达及生物活性鉴定[J]. 中国生物化学与分子生物学报,2003,19.0(006):709. |
| APA | 王鸿鹤,朱孝峰,谢冰芬,冯公侃,沈竞康,&刘宗潮.(2003).人细胞周期蛋白D1／CDK4基因的真核表达及生物活性鉴定.中国生物化学与分子生物学报,19.0(006),709. |
| MLA | 王鸿鹤,et al."人细胞周期蛋白D1／CDK4基因的真核表达及生物活性鉴定".中国生物化学与分子生物学报 19.0.006(2003):709. |
入库方式： OAI收割
来源：上海药物研究所
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