本发明涉及一种赛塔城翠雀花中二萜类生物碱化合物及制备方法和用途，以赛塔城翠雀花（Delphinium pseudoaemulans C.Y.Yang et B.Wang）为原料，用溶剂提取，酸碱处理，溶剂萃取，通过硅胶柱层析法、制备薄层层析法、葡聚糖凝胶LH‑20柱层析法或高效液相色谱法中的两种、三种或四种方式进行分离，采取薄层层析法或高效液相色谱法检测分析，得到新的二萜类生物碱化合物。并对所述化合物进行了体外肿瘤细胞毒活性测定，实验结果表明：从赛塔城翠雀花中分离的二萜类生物碱化合物对人肺癌A549细胞以及人宫颈癌Hela细胞表现出不同程度的抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。