本发明涉及一种山莴苣苦素的制备方法，该方法以毛菊苣根提取物为原料，通过正相硅胶色谱和低温反相C18制备色谱的结合，从毛菊苣根提取物中分离得到富含山莴苣苦素的组分溶液中获得纯度高于98%的山莴苣苦素对照品。所得山莴苦素对照品可用于药材标准化过程中的定量定性学研究。该方法简单易行，纯化效率高，具有一定的应用价值。对照品质量符合国家标准样品，可用于国家标准样品的申请，进而为富含山莴苣苦素的药材的质量标准作出贡献。