目的:建立HPLC-DAD波长切换联合梯度洗脱法同时测定10批新疆不同产地的一枝蒿药材中5种化学成分（异绿原酸A、异绿原酸C、蒙花苷、一枝蒿酮酸和金腰乙素）的分析方法。方法:采用HPLC-DAD法InertSustainR C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）色谱柱;乙腈（A）-0.2%磷酸（B）为流动相,流速为1.0 mL·min-1,梯度洗脱;异绿原酸A和异绿原酸C的检测波长为320 nm,蒙花苷检测波长为334 nm,一枝蒿酮酸检测波长为245 nm,金腰乙素检测波长为350 nm;进样量为10μL。建立一枝蒿药材指纹图谱,并进行相似度评价,采用SPSS 23.0统计软件对含量测定结果进行聚类分析。结果:10批样品指纹图谱有25个共有缝,相似度≥0.90;10批样品聚为2类。结论:该方法操作简便、快速、准确,为一枝蒿药材的质量控制及药用价值评价提供了科学依据。