本发明涉及一种毛序准噶尔乌头中二萜类生物碱化合物的制备方法和用途，该方法以毛序准噶尔乌头药材为原料，用溶剂提取，酸溶碱沉后，溶剂萃取，通过硅胶柱层析法、硅胶制备薄层层析或葡聚糖凝胶LH?20柱层析法的两种或三种方式进行分离，得到3个二萜类生物碱化合物。本发明对所得到的化合物进行了体外细胞毒活性测定，实验结果表明：从毛序准噶尔乌头中分离得到的二萜类生物碱化合物14?苯甲酰基?8?甲氧基乌头宁，新江油乌头碱，查斯曼宁对人乳腺癌细胞MCF?7、人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC?3有不同程度的细胞毒活性，可用于制备抗肿瘤药物。