寨卡病毒（ZIKV）是一种单股正链RNA病毒，因严重威胁全球公共卫生而受到广泛关注。ZIKV可造成先天性小头畸形，以及成人严重的神经系统疾病格林-巴利综合征等。由于ZIKV既通过蚊媒传播，又可通过非媒介传播途径传播，控制寨卡疾病的传播比较困难，且感染ZIKV后有很高的风险和严重的健康威胁。因此，研制安全有效的寨卡病毒疫苗显得极其重要和紧迫。重组蛋白疫苗是一种包含病毒抗原蛋白的新型疫苗，因其良好的安全性受到研究者们的广泛青睐。但由于病毒抗原本身的免疫原性较弱，需要添加佐剂以及选择合适的递送系统，使其可以诱导强大的体液免疫与细胞免疫。E蛋白作为寨卡病毒的关键结构蛋白，是研制寨卡疫苗的理想抗原。为增强E蛋白的免疫原性，需要在抗原中加入佐剂。β-葡聚糖作为一种多糖佐剂，可以激活巨噬细胞并触发细胞免疫反应，将E蛋白与β-葡聚糖共价偶联是一种提高E蛋白免疫原性的策略。然而，E蛋白的抗原表位和β-葡聚糖的免疫调节位点在偶联物中会被屏蔽，此外，偶联物也可能会引发对β-葡聚糖的非预期免疫反应。因此，将酸敏感的腙键和硫醇敏感的二硫键用作E蛋白和β-葡聚糖之间的连接键，得到偶联物E-PS-4。当偶联物进入免疫细胞后，在溶酶体中的低pH及细胞质中高水平谷胱甘肽的作用下，导致腙键水解和二硫键还原，使E蛋白与β-葡聚糖充分解离，克服了抗原表位和免疫调节位点被屏蔽的缺点。与没有腙键和/或二硫键的偶联物相比，E-PS-4刺激产生了高水平的E蛋白特异性IgG，β-葡聚糖特异性IgG滴度较低，并且可诱导分泌高水平的IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-10。此外，E-PS-4可促进树突状细胞的活化，且对器官没有明显的毒副作用。药代动力学研究表明，E-PS-4的血清持续时间比E蛋白更长。因此，E蛋白通过腙键和二硫键与β-葡聚糖结合，可以刺激机体产生较强的细胞和体液免疫反应。EDⅢ蛋白是寨卡病毒E蛋白的第三结构域，包含了大部分中和抗体表位，且不会引起抗体依赖增强（ADE）效应。然而，EDⅢ蛋白必须与佐剂和抗原递送系统一起使用，以提高其免疫原性。血红蛋白（Hb）可以调节炎症和细胞因子水平，并激活巨噬细胞。甘露聚糖（Mannan）是组成真菌细胞壁的多糖，具有免疫调节活性。因此，我们将EDⅢ、血红蛋白和甘露聚糖共价结合，血红蛋白和甘露聚糖均作为佐剂，先进行共价结合，偶联物（HM）作为递送系统，以二硫键为连接键与EDⅢ偶联，得到偶联物HM-EDⅢ-2。通过细胞内高水平谷胱甘肽环境下二硫键的断裂，可以实现EDⅢ与HM在细胞内的有效分离。结构分析表明，与HM偶联后，可以基本维持EDⅢ的二级和三级结构。免疫学研究表明，与EDⅢ相比，HM-EDⅢ-2可以诱导更高水平的EDⅢ特异性IgG滴度，并可分泌高水平的IFN-γ、IL-2、IL-5和IL-10细胞因子，并且对器官没有明显的毒性。此外，药代动力学研究显示，HM-EDⅢ-2可延长EDⅢ的血清暴露时间并延长其半衰期。因此，HM-EDⅢ-2可以增强对EDⅢ的体液和细胞免疫应答。我们的研究有望为开发一种安全有效的寨卡病毒疫苗提供一种途径。