基于阿拉伯半乳聚糖修饰和自组装的DhaA及其稳定性的研究
文献类型:学位论文
作者 | 王美琪 |
答辩日期 | 2021-06-01 |
文献子类 | 硕士 |
授予单位 | 中国科学院过程工程研究所 |
导师 | 胡涛 |
关键词 | 阿拉伯半乳聚糖,Dhaa,酶稳定化,自组装,多糖修饰 |
英文摘要 | DhaA可以通过水解脱卤机制催化芥子气的碳-氯键断裂,生成硫二甘醇和氯离子。该催化反应不会生成有毒的产物和中间产物,且催化效率较高,这使得芥子气的无毒害降解成为可能。然而,DhaA的稳定性较差,这限制了它作为生物酶洗消剂的应用。为了解决这个问题,本论文设计了两种方案以改善DhaA的环境稳定性。第一种方案是用阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan, AG)对DhaA进行化学修饰。AG的结构特点是高度支链化且羟基含量丰富,因此具有一定保护蛋白质的潜力。DhaA的修饰产物AG-DhaA的表观分子量为150 kDa,其中AG和DhaA的摩尔比为4.5±1.1,其水化体积是DhaA的70倍左右。而且AG-DhaA仍保留有91.1%的酶活性,酶促动力学参数也在很大程度上得到保留。其圆二色光谱分析显示DhaA的α-螺旋和β-折叠含量为44.1%和14.3%,AG-DhaA的α-螺旋含量和β-折叠含量为33.9%和18.3%。因此,AG修饰并未明显改变蛋白本身的结构,仅有部分α-螺旋转化为β-折叠。与游离的DhaA相比,AG-DhaA的环境稳定性显著提高。在50℃下处理4h后,其剩余相对活性由13.6%提高到了33.4%,半衰期由1.17h延长到了2.01h;在pH 3.0中处理1h后的剩余相对活性由10.6%提高到了35.2%;在37℃下储存144h后,其剩余相对活性由4.4%提高到了25.6%,半衰期由27.61h延长到了56.35h;在高盐溶液中处理16h后,其剩余相对活性由39.3%提高到了80.8%,半衰期由12.12h延长到了47.48h。AG修饰为DhaA提供了稳定的保护性水化层。水化层的存在和大分子本身的屏蔽作用,能够在一定程度上避免催化核心区域被溶剂攻击,而且稳定的水化层也可以减缓低pH条件下的质子化过程和盐离子的侵蚀,从而提高DhaA的pH稳定性和高盐稳定性。此外,AG形成的水化层可以部分抵抗高温的影响,维持DhaA的天然构象,抑制其聚集。为了进一步提高DhaA的环境稳定性,在多糖修饰DhaA的基础上,本论文还开发了第二种方法。AG-DhaA在最适pH下带有负电荷,可以与带有正电荷的大分子在水相中自组装形成纳米颗粒。本论文选择了两种带有正电荷的大分子:壳聚糖(Chitosan,CTS)和聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI),使其在水相中和分别和带负电荷的AG-DhaA通过静电相互作用,自组装形成纳米颗粒。其中,PEI-AG-DhaA的粒径为82.97±24.77nm,而CTS-AG-DhaA的粒径为151.36±69.22nm。与AG-DhaA相比,PEI-AG-DhaA和CTS-AG-DhaA颗粒的酶动力学参数和酶活性仅有轻微的损失。PEI-AG-DhaA和CTS-AG-DhaA的环境稳定性进一步提升。PEI-AG-DhaA和CTS-AG-DhaA在50℃下处理10h后,其剩余相对活性分别由12.9%提高到52.5%和34.7%,半衰期由3.28h延长到8.55h和5.66h;在pH 3.0条件下处理1h后,其剩余相对活性由22.8%提高到了35.0%和33.4%;在pH 4.0条件下处理1h后,其剩余相对活性由36.6%提高到了56.8%和86.2%;在37℃下储存6d后,其剩余相对活性提高到了51.5%和41.5%,半衰期由2.51d延长到了7.39d和5.38d。其中,PEI-AG-DhaA的热稳定性和储存稳定性高于CTS-AG-DhaA;而CTS-AG-DhaA的pH稳定性高于PEI-AG-DhaA。 |
语种 | 中文 |
源URL | [http://ir.ipe.ac.cn/handle/122111/60887] ![]() |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 王美琪. 基于阿拉伯半乳聚糖修饰和自组装的DhaA及其稳定性的研究[D]. 中国科学院过程工程研究所. 2021. |
入库方式: OAI收割
来源:过程工程研究所
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