本发明公开了一种深海海参来源的耐高温且耐有机溶剂的超氧化物歧化酶Cu,ZnSOD及其制备方法，该方法使用冷休克表达载体pColdⅡ构建原核表达重组质粒，进行重组蛋白表达。通过该方法，重组蛋白能够在上清中大量表达，易于后期纯化，能够快速获得产量高、纯度高、活力好的Cu,ZnSOD。本发明的表达产物具有耐高温且耐有机溶剂的特性，可大规模应用于医药、美容、化工等领域，节约成本。