本发明公开了一种深海海参来源的冷适应性且耐酸超氧化物歧化酶Cu,ZnSOD及其制备方法，该方法使用冷休克表达载体pColdⅡ构建原核表达重组质粒，进行重组蛋白表达。通过该方法，重组蛋白能够在上清中大量表达，易于后期纯化，能够快速获得产量高、纯度高、活力好的Cu,ZnSOD。本发明的表达产物具有耐低温、在酸性条件下稳定性好,消化酶耐受性强的特性，可作为食品添加剂，保鲜剂，口服补充剂等大规模应用于食品、医药等领域，节约成本。