CRISPR/Cas9技术在牙鲆性别与肌肉发育相关基因编辑中的应用研究
文献类型：CNKI期刊论文
| 作者 | 王凌 ; 谭训刚; 吴志昊; 王丽娟; 尤锋
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| 发表日期 | 2021-09-02 |
| 出处 | 农业生物技术学报
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| 关键词 | CRISPR/Cas9 牙鲆 基因编辑 |
| 英文摘要 | CRISPR/Cas9是对靶向基因进行特定DNA修饰的基因编辑技术。基于其设计简单、成本较低和效率较高等优点,在哺乳动物中已被广泛应用于基因功能研究。在鱼类中,CRISPR/Cas9技术多用于模式鱼及淡水鱼类中基因的敲除,从而对基因的功能进行研究,而在海水鱼类特别是鲆鲽鱼类中相关研究还较少。牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水养殖鱼类,具有较高的经济价值。本研究首先在低浓度条件下(Cas9 message RNA (mRNA)和向导RNA (guide RNA, gRNA)浓度分别为250和100 ng/μL)对牙鲆肌肉发育相关基因肌分化因子(myogenic differentiation, myod)和性腺分化与发育相关基因接头相关蛋白复合物3 (adaptor-related protein complex 3, ap3)、脊椎蛋白1 (R-spondin 1, rspo1)及轴丝动力蛋白轻中链1 (dynein axonemal light intermediate chain 1, dnali1)(dnali1-part A和dnali1-part B)基因进行编辑,其中,dnali1-part A和dnali1-part B各设计2个gRNA位点,其余基因均设计1个。结果显示,rspo1、myod及dnali1-part A编辑实验鱼苗中均未检测到突变体,ap3基因突变率小于14.3%,而dnali1-part B突变率约为42.9%～45%。提高注射浓度至Cas9 mRNA 1 500 ng/μL和gRNA 1 000 ng/μL后,dnali1-part B突变率提高至65%。同时,单个个体检测的突变率也由10%～20%提升至80%～90%。进一步用高浓度条件对牙鲆原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)标志基因dead end (dnd)、两性mab-3转录因子1 (doublesex and mab-3 related transcription factor 1, dmrt1)和17β羟类固醇脱氢酶1 (hydroxysteroid (17-beta)dehydrogenase 1, 17β-Hsd1)基因(2个gRNA)进行编辑,初孵仔鱼检测的各基因突变效率均为60%～80%。研究结果表明,低浓度条件下1个gRNA位点的基因编辑效率较低,仅为14.3%～45%,而高浓度下2个gRNA位点的基因编辑效率明显提高,可达60%～80%。本研究初步建立了牙鲆CRISPR/Cas9基因编辑方法,并为其在鲆鲽鱼类中的应用提供参考。 |
| 文献子类 | CNKI期刊论文 |
| 资助机构 | 国家重点研发计划(2018YFD0900202 ; 2018YFD0901202) ; 国家自然科学基金(31772834 ; 31672636) |
| 卷 | v.29期:09页:130-140 |
| 语种 | 中文; |
| 分类号 | S917.4 |
| ISSN号 | 1674-7968 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/187683]  |
| 专题 | 中国科学院海洋研究所 |
| 作者单位 | 1.中国科学院大学 2.中国科学院海洋研究所/海洋大科学中心/实验海洋生物学重点实验室 3.青岛海洋科学与技术国家实验室/实验海洋生物学与生物技术实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王凌,谭训刚,吴志昊,等. CRISPR/Cas9技术在牙鲆性别与肌肉发育相关基因编辑中的应用研究. 2021. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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