Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响
文献类型：CNKI期刊论文
| 作者 | 孙玉英; 严翠; 王淑军; 张继泉; 赵宏; 赵斌元 |
| 发表日期 | 2016-08-15 |
| 出处 | 食品工业科技
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| 关键词 | 壳聚糖酶 定点突变 比活力 必需氨基酸 |
| 英文摘要 | 为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的p CT7-CHISP6H-m Mschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51(突变成Gln51)和Asp69(突变成Asn69)进行突变,从而构建了两个单位点突变,突变质粒分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后酶的比活性,突变酶(Asp69→Asn69)比活力与野生型相比几乎不变,而突变酶(Glu51→Gln51)比活力大约为野生型的10%。通过测定动力学常数发现,突变酶和天然酶Km几乎没有很明显的变化,但是突变酶(Glu51→Gln51)的Vmax与上述两种酶的Vmax相比有很明显的变化。采用DNA Star和Deep view分析软件,预测突变前后壳聚糖酶的二级结构和三级结构,结果表明,Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51极有可能是维持酶的催化活力的必需氨基酸,它的突变可能导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变,从而导致酶活力的丧失。 |
| DOI标识 | 10.13386/j.issn1002-0306.2016.16.025 |
| 文献子类 | CNKI期刊论文 |
| 资助机构 | 碳谷-江苏海资院海洋先进材料联合研究中心开放课题(TG-201402) ; 江苏省科技项目产学研联合创新资金——前瞻性联合研究项目(BY2014085) ; 连云港市中小企业技术创新项目(CK1419) |
| 卷 | v.37;No.360期:16页:157-161+167 |
| 语种 | 中文; |
| 分类号 | TQ925 |
| ISSN号 | 1002-0306 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/189579]  |
| 专题 | 中国科学院海洋研究所 |
| 作者单位 | 1.淮海工学院海洋学院 2.江苏省海洋资源开发研究院 3.中国科学院海洋研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 孙玉英,严翠,王淑军,等. Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响. 2016. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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