带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定
文献类型：CNKI期刊论文
| 作者 | 赵向忠; 刘明; 丁丽丽; 吴宁; 林秀坤 |
| 发表日期 | 2010-08-26 |
| 出处 | 生物技术通报
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| 关键词 | p53基因 斑马鱼 真核表达 HeLa细胞 |
| 英文摘要 | 构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting检测基因表达情况。结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带。斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达。 |
| DOI标识 | 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2010.08.039 |
| 文献子类 | CNKI期刊论文 |
| 资助机构 | 中科院知识创新工程项目(KSCX2-YW-104,KZCX2-YW-209) |
| 卷 | No.217期:08页:199-202 |
| 语种 | 中文; |
| 分类号 | S917.4 |
| ISSN号 | 1002-5464 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/191987]  |
| 专题 | 中国科学院海洋研究所 |
| 作者单位 | 1.中国科学院海洋研究所 2.中国科学院研究生院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 赵向忠,刘明,丁丽丽,等. 带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定. 2010. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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