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虹鳟肿瘤坏死因子(TNFα)基因体外表达与纯化的研究

文献类型:CNKI期刊论文

作者蔡中华,宋林生,C J SECOMBES,董双林
发表日期2003-11-20
出处水生生物学报
关键词肿瘤坏死因子 重组 纯化
英文摘要将虹鳟两种肿瘤坏死因子TNFα1和TNFα2基因的成熟肽编码区域 ,用带有BamHI和HindIII酶切位点的基因特异性引物进行PCR扩增。扩增片段用限制性内切酶消化并连接到pQE30表达载体上 ,连接产物转化到大肠杆菌JM10 9感受态细菌中。转化子经PCR筛选 ,质粒测序 ,完成了虹鳟两种TNFα基因重组子的构建。重组子经体外培养和诱导后 ,获得了高效表达的TNFα重组蛋白。高效表达的重组TNFα不受诱导剂IPTG的影响 ,并且由于重组子高效表达而形成了包涵体 ;重组蛋白产量约占菌体蛋白总量的 2 5 %— 30 %。应用Ni NTA和固定金属亲和层析 (IM PC)技术 ,在变性条件下获得了高度纯化的重组蛋白 ,纯化重组蛋白的产量约为 0 5— 1mg L。
文献子类CNKI期刊论文
资助机构国家 8 63基金 (No 2 0 0 1AA62 8118) ; 王宽城博士后奖励基金 (2 0 0 110 0 2 110 14 0 )资助
06页:41-46
语种中文;
分类号S941
ISSN号1000-3207
源URL[http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/196717]  
专题中国科学院海洋研究所
作者单位1.266003
2.中国科学院海洋研究所
3.DepartmentofZoology
4.青岛海洋大学青岛266071
5.天津农学院
6.300384
7.青岛266071
8.UniversityofAberdeen
9.AberdeenAB242TZ
推荐引用方式
GB/T 7714
蔡中华,宋林生,C J SECOMBES,董双林. 虹鳟肿瘤坏死因子(TNFα)基因体外表达与纯化的研究. 2003.

入库方式: OAI收割

来源:海洋研究所

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