中国科学院机构知识库网格系统: 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法

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一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法

文献类型：专利


作者	尤锋 ; 吴志昊 ; 王伟 ; 徐冬冬 ; 张毅 ; 张培军 ; 徐永立
发表日期	2011-08-24
专利号	CN201110027643.1
专利类型	发明
关键词	一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 1尾仔鱼/0.05?0.5mL无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼 4)提取总DNA：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μL?5?6mol/L?NaCl溶液其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼加入生理盐水洗涤加入100?300μL?DNA提取缓冲液和10?30μL细胞裂解缓冲液震荡20?30秒。15000g离心30分钟滤去水后立即加入无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水使细胞破壁吸取上清液使蛋白质去除而后于?20℃或室温保存备用再用滤纸吸干样品而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶K和10?100μg?RNA酶然后在上清液中加入等体积异丙醇鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1mL鱼卵/2?5mL无水乙醇重复2?3次震荡混匀轻轻混匀于50?70℃温育 ?20℃静置1?2小时每10?20分钟颠倒混匀一次 15000g离心15分钟消化至溶液澄清沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总DNA。待用
权利人	中国科学院海洋研究所.
中文摘要	本发明涉及一种DNA提取技术，具体地说是一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法。对采集的鱼卵或仔鱼进行固定保存。冲洗去除固定液后，加入DNA提取缓冲液和细胞裂解缓冲液，将鱼卵或仔鱼剪碎后再加入蛋白酶K和RNA酶，温育消化。用高浓度NaCl溶液沉淀蛋白质，加入异丙醇沉淀DNA，用70％乙醇洗涤沉淀去除盐离子，待乙醇挥发后加入超纯水或TE溶液溶解。本方法解决了常规总DNA提取方法在鱼卵或仔鱼等基因组DNA含量较少样品中应用的限制问题。
公开日期	2011-08-24
申请日期	2011-01-21
语种	中文
专利申请号	CN201110027643.1
源URL	[http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17301]
专题	海洋研究所_实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	尤锋,吴志昊,王伟,等. 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法. CN201110027643.1. 2011-08-24.

入库方式： OAI收割

来源：海洋研究所

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