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一种对虾肠道微生物DNA的提取方法

文献类型：专利


作者	刘淮德 ; 王雷 ; 刘梅 ; 王宝杰 ; 蒋克勇
发表日期	2010-06-23
专利号	CN200910263665.0
专利类型	发明
关键词	一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 2)将洗脱液在200g离心5-10min 沉淀中加0.8-1.2mL?PBS以200g离心取上清菌液 3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min 4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μLCTAB提取液和10-15μL溶菌酶而后加15-20μL?20％(W/C)SDS和10-15μL蛋白酶K 5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min 6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min 7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇 8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μL?70％预冷乙醇其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨取上清菌液待用将两次离心所得上清菌液合并收集上清菌液放入37℃摇床 60-70℃水浴1-2h 取上清菌液取上清菌液而后于-20℃静置1-2h 14000g离心10-15min 并加入0.8-1.2mL?PBS 合并上清液以300g离心5-10min 振荡30-40min 而后加100-150μL?CTAB液和20-25μL?20％SDS混匀后而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液再以4℃?14000g离心10-15min 所得沉淀即为对虾肠道微生物DNA。 15-25μL?PVPP匀浆和200-300μL?0.5％Tween-80 取上清菌液待用涡旋 14000g离心10-15min 所得沉淀待用均匀后吹打洗脱3-5min 60-70℃水浴10-15min 取上清菌液待用
权利人	中国科学院海洋研究所.
中文摘要	本发明属于微生物学和分子生态学领域，具体涉及一种对虾肠道微生物DNA的提取方法。具体为过程采用液氮研磨，机械力破壁，溶菌酶，SDS裂解液裂解细胞，然后经分离、析出得到DNA沉淀，最后用TE溶解得到质量较好的DNA。本发明得到的产物DNA片段大于20Kb，可进行基因扩增和测序。本发明通用性好，适用于各种甲壳类水产动物肠道微生物DNA提取，仅一次提取即得到高质量的模板DNA，不需要重复实验，所获得的DNA可用于分子生态学、系统进化等研究。
公开日期	2010-06-23
申请日期	2009-12-18
语种	中文
专利申请号	CN200910263665.0
源URL	[http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17153]
专题	海洋研究所_海洋生物技术研发中心
推荐引用方式 GB/T 7714	刘淮德,王雷,刘梅,等. 一种对虾肠道微生物DNA的提取方法. CN200910263665.0. 2010-06-23.

入库方式： OAI收割

来源：海洋研究所

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