中国明对虾凋亡基因caspase的克隆、表达及功能的初步分析
文献类型：学位论文
| 作者 | 宋光年 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2010-05-01 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 相建海 |
| 关键词 | 中国明对虾 Caspase基因克隆 WSSV攻毒 实时定量PCR分析 RNAi 流式细胞仪 |
| 学位专业 | 海洋生物学 |
| 中文摘要 | 对虾是最重要的海水养殖产品之一，但是对虾病害在世界范围内的广泛传播，给水产养殖和沿海农村经济造成了重大损失。自1993年对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus，WSSV)爆发以来，中国明对虾的养殖一直一蹶不振，白斑病毒已成为危害对虾养殖的最主要病原。因此，解决这一问题的关键是加强对对虾的非特异性免疫系统的研究，从而在此基础上探索对虾病害防治的新途径。本论文根据其他无脊椎动物中caspase基因的保守氨基酸序列设计简并引物，从中国明对虾血细胞cDNA中克隆到了caspase基因片段，命名为FcCasp。 FcCasp的cDNA含有954个核苷酸，编码317个氨基酸，FcCasp蛋白的预测分子量为35592．8 Da，理论等电点为5．37。通过功能域分析发现FcCasp推导的氨基酸序列中含有一个caspase家族典型的QACRG五肽保守序列(定位在190-194位氨基酸)。P20大亚基定位在67-196位氨基酸，P10小亚基定位在218-317位氨基酸。分析了FcCasp在血细胞、淋巴器官、肠和肝胰脏等7个组织中的表达水平。组织表达结果表明FcCasp在血细胞、肝胰脏和淋巴器官中表达水平明显高于其他组织，而淋巴器官和血细胞是对虾免疫系统中最重要的两个组织，由此可以推测中国明对虾中的FcCasp可能与免疫关系密切。本论文还利用实时荧光定量PCR技术，对WSSV病毒刺激后，对虾肝胰脏中FcCasp基因的转录水平进行了研究。用WSSV病毒刺激后，在不同时间提取对虾肝胰腺总RNA，进行Real-time PCR分析，结果发现FcCasp基因在病毒刺激后有上调表达，这说明FcCasp对WSSV病毒刺激产生了应答，提示FcCasp基因可能参与中国明对虾的先天免疫防御，并与细胞凋亡相关。为了进一步了解 FcCasp在细胞凋亡中的作用，采用RNAi技术抑制FcCasp基因的表达。结果表明，当FcCasp基因的转录表达受到抑制时，对虾的血细胞凋亡也受到抑制，这说明FcCasp基因直接参与细胞凋亡。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2014-08-08 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17820]  |
| 专题 | 海洋研究所_实验海洋生物学重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 宋光年. 中国明对虾凋亡基因caspase的克隆、表达及功能的初步分析[D]. 中国科学院研究生院. 2010. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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