人源化抗体酶GPX的性质研究及硒化位点的测定
文献类型：学位论文
| 作者 | 方芳 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2001 |
| 授予单位 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 关键词 | 含硒抗体酶 人单链抗体库 化学修饰 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| 学位专业 | 无机化学 |
| 中文摘要 | 谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）是生物体内抗氧化应激酶系的重要成员，是一种含硒酶，它通过消除过氧化氢 （H_2O_2）和有机氢过氧化物（ROOH），保护机体免受活性的损伤或减少活笥氧对机伤程度。GPX的缺乏与多种疾病有关。天然GPX来源极其有限，因此研制具 GPX活力的人源抗体酶并且对其性质的研究对在临床上应用GPX治疗与其缺乏相关的疾病有重要意义。我们在本小组已从噬菌体展示的人单链抗体库中筛选得到了对S-2，4-二硝基苯基取代的谷胱甘肽二丁酯（Hp3）特异的单链抗体3B10并对之高效表达的基础上，进行了细菌培养 、包含体提取、蛋白体的变性与复性，纯化。并经过蛋白电泳和ELISA分析，证明所得的纯化后的蛋白为所需的半抗原特异的人单链抗体。并用化学修饰法把GPX的催化基团硒代半胱氨酸（Sec）组装到已复性、纯化的单链抗体3B10中，获得了具有GPX活力为75.4U/μmol的人源含硒抗体酶Sec-3B10。通过酶学性质的测定可知抗体酶在pH值为8.0、温度为37 ℃时生物活性最高。通过动力学性质的研究证明含硒抗体酶GPX的催化机制与天然GPX一样，符合Ping-Pong机制。光谱性质的研究可推知硒化位点位于蛋白的可变区CDR3区，在经过酶切，通过质谱测定后，比较硒化与未硒化的氨基酸片段的质量差可证实硒化位点位于蛋白的可变区CDR3。为鉴定经化学修饰法硒化的位置提供了一种手段。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2011-01-17 |
| 页码 | 70 |
| 源URL | [http://ir.ciac.jl.cn/handle/322003/34099]  |
| 专题 | 长春应用化学研究所_长春应用化学研究所知识产出_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 方芳. 人源化抗体酶GPX的性质研究及硒化位点的测定[D]. 中国科学院长春应用化学研究所. 中国科学院长春应用化学研究所. 2001. |
入库方式： OAI收割
来源：长春应用化学研究所
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