甲状腺素脱碘酶的人工模拟研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 廉革伟 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2001 |
| 授予单位 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 授予地点 | 长春应用化学研究所 |
| 关键词 | 甲状腺素 脱碘酶 单克隆抗体 化学修饰 含硒抗体酶 |
| 学位专业 | 无机化学 |
| 中文摘要 | 甲状腺激素，特别是3，3'，5一三碘甲状腺素（T_3）对机体新陈代谢与能量的内稳定、生长发育、其它激素分泌等发挥着重要调节作用。甲状腺素脱碘酶是九十年代后才发现的能够催化甲状腺激素不同降解反应的一簇含硒酶，对维持甲状腺激素在体内的动态平衡和生物活性起关键作用。它们的缺乏将导致机体产生多种与甲状腺激素有关的严重疾病。由于脱碘酶稳定性差，体内含量极微且基因表达困难等，因此，开展脱碘酶的人工模拟研究具有重要意义。以天然脱碘酶的初步催化机制和疏水腔修饰法的半抗原设计思想为依据，设计合成了三种疏水性不同的甲状腺素衍生物半抗原：o-methyl-T_4，o-benzyl-T_4和o-p-nitro-benzyl-T_4，并对其结构进行了表征。半抗原与载体蛋白偶联制备出全抗原，经免疫Balb/C小鼠、细胞融合、多轮克隆化与筛选，获得一株分泌抗-T_4的单抗细胞株4C5和一株分泌抗-o-methyl-T_4的单抗细胞株688。经腹水制备和分离纯化，获得单克隆抗体4C5和6E8。通过化学组装将催化基团Sec引入到抗体的抗原结合部位，制备出两种分别对半抗原T_4和o-methyl-T_4特异的含硒抗体酶Se-4C5和Se-6E8，其最大酶活力分别为270和480 U/mg protein,为含天然酶的鼠肝匀浆液活力(36 Ulmg protein)的7.5及13.3倍，是国内外首次报道的具有脱碘酶活性的含硒抗体酶。同时对它们的理化性质、酶促反应、动力学性质以及Fab片段的活性等方面进行了系统的研究，用化学修饰法鉴定了催化部位的一些关键氨基酸。指出抗体酶催化的反应与工型脱碘酶相似，属乒乓机制，且PTU抑制作用也相一致，因此确认为I型脱碘酶模拟物，并提出了较详细的脱碘酶催化机制和过渡态的形成过程，这将对天然脱碘酶催化机理的完善和药用价值的模拟酶研究等具有重要意义。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2011-01-17 |
| 页码 | 146 |
| 源URL | [http://ir.ciac.jl.cn/handle/322003/34143]  |
| 专题 | 长春应用化学研究所_长春应用化学研究所知识产出_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 廉革伟. 甲状腺素脱碘酶的人工模拟研究[D]. 长春应用化学研究所. 中国科学院长春应用化学研究所. 2001. |
入库方式： OAI收割
来源：长春应用化学研究所
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