中国科学院机构知识库网格
Chinese Academy of Sciences Institutional Repositories Grid
机构
采集方式
内容类型
  • 专利 [1]
发表日期
学科主题
筛选

浏览/检索结果: 共1条,第1-1条 帮助

限定条件    
条数/页: 排序方式:
栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200810015048.4, 申请日期: 2008-09-03, 公开日期: 2008-09-03
宋林生; 李凌; 赵建民
收藏  |  浏览/下载:24/0  |  提交时间:2014/08/04
1  2)抗病群体和敏感群体的制备  3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选  4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆:参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总DNA  根据已知的G-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物  即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体  PCR扩增42个敏感个体和40个抗病个体的G-型溶菌酶启动区序列后  其中-754ID和-754II个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别  一种栉孔扇贝抗病相关G-型溶菌酶基因标记  克隆得到一段762个碱基的DNA序列  用病原菌浸泡感染  针对-754TATCTCGATCAGG插入/缺失(I/D)及-391A/G转换分别选用Taq I和Hap II对PCR产物进行酶切  而-391AA个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体  其特征在于它的技术内容包括以下四个方面:1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆  连入T载体后进行测序  根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力  聚丙烯酰胺凝胶电泳后  -391AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此  获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备:采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体  将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选:对来自5个个体的10个克隆进行了测序  各发现两种基因型  将-391AA作为疾病敏感相关的G-型溶菌酶基因标记  发现了10处多态性位点  -754II  而将-391AG作为抗病相关的G-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查:取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版  -754ID  PCR扩增G-型溶菌酶基因启动区序列  -391AA和-391AG  用Hap II对产物进行酶切  聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后  选择-391AG个体作为抗病个体。