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	文蛤微卫星标记的检测方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN201210112746.2, 申请日期: 2013-01-02, 公开日期: 2013-01-02 作者: 刘保忠收藏 \| 浏览/下载：52/0 \| 提交时间：2014/08/04 文蛤微卫星标记的检测方法所述特异性引物为正链：5’?TCCCAGGAACGATTGTTAGG?3’ 其特征在于：首先利用文蛤EST序列获取微卫星标记的微卫星核心序列负链：5’?AGCATTCACGACACCAACAT?3’。并在其序列两端设计特异性引物并进行PCR扩增对PCR产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测从而检测文蛤个体的基因型及在此微卫星位点的遗传变异获得文蛤该位点的遗传多态性图谱
	一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN201210112325.X, 申请日期: 2012-10-10, 公开日期: 2012-10-10 作者: 刘保忠收藏 \| 浏览/下载：30/0 \| 提交时间：2014/08/04 一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 2)引物设计：在微卫星重复的侧翼序列利用软件Primer?Premier?5.0设计引物 GC含量为40％?60％退火温度为45?65℃ 预期PCR产物长度为100?400bp 3)引物优化：根据不同引物的Tm值进行温度梯度优化 4)微卫星标记家系鉴定体系的确立：微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(PIC)衡量包括微卫星位点来源引物设计条件为：引物长度为19?25mer 在Tm值上下各10℃ 根据上述优化获得的Ta值引物设计温度梯度优化扩增得到的PCR产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳?EB染色系统进行检测选取多个体作为群体进行计算微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(PIC)进而衡量多态性信息引物优化和微卫星标记家系鉴定体系选取杂带较少根据PIC值其特征在于：1)微卫星位点的来源：提取文蛤的基因组DNA利用提取的DNA 特异性产物亮度较高的PCR反应对应的温度为该引物的最佳退火温度Ta PIC小于0.25的标记采用限制性内切酶法获得文蛤基因组DNA片段筛选得到重复性好并构建微卫星磁珠富集文库稳定性好检测阳性克隆 PIC值大于0.25的位点经测序得到含有微卫星重复的DNA序列作为文蛤微卫星标记家系鉴定体系用于文蛤的家系区分与个体识别。
	栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN200810015048.4, 申请日期: 2008-09-03, 公开日期: 2008-09-03 宋林生; 李凌; 赵建民收藏 \| 浏览/下载：34/0 \| 提交时间：2014/08/04 1 2)抗病群体和敏感群体的制备 3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选 4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆：参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总DNA 根据已知的G-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体 PCR扩增42个敏感个体和40个抗病个体的G-型溶菌酶启动区序列后其中-754ID和-754II个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别一种栉孔扇贝抗病相关G-型溶菌酶基因标记克隆得到一段762个碱基的DNA序列用病原菌浸泡感染针对-754TATCTCGATCAGG插入/缺失(I/D)及-391A/G转换分别选用Taq I和Hap II对PCR产物进行酶切而-391AA个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体其特征在于它的技术内容包括以下四个方面：1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆连入T载体后进行测序根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力聚丙烯酰胺凝胶电泳后 -391AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备：采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选：对来自5个个体的10个克隆进行了测序各发现两种基因型将-391AA作为疾病敏感相关的G-型溶菌酶基因标记发现了10处多态性位点 -754II 而将-391AG作为抗病相关的G-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查：取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版 -754ID PCR扩增G-型溶菌酶基因启动区序列 -391AA和-391AG 用Hap II对产物进行酶切聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后选择-391AG个体作为抗病个体。
	汞(Ⅱ)-有机物-悬浮物体系的吸附行为和电泳特征的探讨期刊论文 OAI收割环境科学学报, 1985, 期号: 4, 页码: 411-421 邓一苇; 刘静宜收藏 \| 浏览/下载：28/0 \| 提交时间：2012/03/16 电泳特征巯基乙酸悬浮物体吸附行为悬浮体系模化吸附汞微粒氯化汞有机物