新型EGFR三代抑制剂120120的抗肿瘤作用研究
文献类型：会议论文
| 作者 | 瞿戎; 陈成斌; 彭婷; 童林江; 丁克; 谢华 ; 丁健
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| 出版日期 | 2015-04-24 |
| 关键词 | EGFR NIH 基因型 细胞株 遗传型 NCI 浮选药剂 抑制剂 抑制活性 三代 |
| 页码 | 2 |
| 英文摘要 | 目的选择性抑制EGFRT790M耐药突变的EGFR三代抑制剂是抗肿瘤药物研究的热点。我们与化学家合作,设计、合成一系列新结构EGFR三代抑制剂,通过筛选发现化合物120120为高活性化合物之一,具有高活性、低毒性、易合成等特点,已申请专利。本研究深入研究化合物120120靶点抑制作用和体外、体内抗肿瘤作用及其作用机制,为其进一步研究奠定基础。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)研究化合物120120对EGFR~(L858R/T790M)、野生型EGFR(EGFR~(WT))的抑制活性,以及对58种其他种类酪氨酸激酶的抑制作用,明确其激酶抑制活性及靶点选择性。然后,采用磺酰罗丹明(SRB)法检测其对含不同EGFR基因型的人肿瘤细胞株的增殖抑制活性;并采用Western Blot方法检测化合物对以上种类肿瘤细胞、以及构建高表达不同EGFR基因型的NIH3T3工具细胞内的EGFR磷酸化及下游主要信号通路中关键分子AKT、ERK活化的抑制作用。此外,在NCI-H1975裸小鼠移植瘤模型中检测120120的肿瘤生长抑制作用及其靶点抑制作用,并采用免疫组化方法检测其对瘤组织内靶点的抑制活性。结果首先检测了化合物120120的体外激酶抑制活性。结果显示,化合物120120强效抑制EGFRL~(L858R/T790M)激酶活性,其IC50为0.6±0.3nM,而对EGFR~(WT)抑制较弱(IC_(50)为31.7±21.2 nM),因此120120在分子水平对EGFR~(L858R/T790M)的选择性达到50倍以上。与临床研究研究进展最快的阳性药AZD9291和CO-1686相比,120120对EGFR~(L858R/T790M)激酶体外活性抑制作用及选择性均优于二者。激酶谱检测结果显示,120120对EGFR家族其他激酶(如ErbB2、ErbB4)有较弱抑制活性;对与EGFRL858R/T790M同源性较高的BTK、JAK3有一定抑制活性,其中对JAK3抑制较弱,IC5_(50)949.5±61.8 nM,而BTK激酶抑制活性较强(IC_(50)为4.6±2.6nM,弱于EGFR~(L858R/T790M)抑制活性约一个数量级),值得进一步研究;除此之外,对所检测的其余44种激酶没有显著抑制活性。激酶谱检测结果表明,120120为强效、高选择性的EGFR三代抑制剂,选择性抑制EGFR~(L858R/T790M)。接下来我们检测了120120在细胞水平的靶点抑制活性和抗肿瘤体外增殖活性。我们选择含EGFR~(L858R/T790M)的NCI-H1975细胞、含EGFR~(WT)的A431细胞和含EGFR(exon19del)敏感突变的HCC827细胞进行检测。SRB结果显示,120120显著抑制NCI-H1975和HCC827细胞的增殖(IC_(50)为10 nM),而对A431细胞增殖抑制活性弱(IC_(50)为259.6 nM);Western blot结果进一步证实,120120浓度依赖性抑制NCI-H1975、HCC827细胞株中EGF诱导的EGFR及其下游信号分子Erk1/2、AKT的磷酸化,10 nM浓度即显示出显著抑制活性;而对A431细胞株中EGFR及下游信号通路抑制活性弱(>100nM)。此外,在人工构建分别表达不同基因型EGFR的NIH-3T3工具细胞株中,Westem Blot方法检测120120对靶点抑制活性,结果与肿瘤细胞内的检测结果相一致。因此,该结果表明120120在细胞水平亦显示出对EGFRL858R/T790M抑制的选择性,其抑制活性及选择性与阳性化合物CO-1686相当。接下来,我们在NCI-H1975裸小鼠移植瘤模型中检测120120对肿瘤生长的抑制作用。结果显示:120120剂量依赖性抑制NCI-H1975移植瘤的生长。100mg/kg给药组(p.o.,qd)对NCI-H1975移植瘤生长有极其显著的抑制作用,给药第7天小鼠肿瘤全部消退;低剂量(10mg/kg)组亦显示出显著抑制活性,在第21天所得T/C百分数为33.94%。同剂量比较,120120的抑瘤活性与阳性药AZD9291相当,优于CO-1686。此外,动物耐受性好,体重未见明显减轻。瘤组织免疫组化结果显示,与对照组相比,120120 10mg/kg给药组瘤组织内EGFR~(L858R/T790M)的磷酸化水平显著降低。由此表明,120120通过抑制肿瘤组织内EGFRL858R/T790M的活化,从而显著抑制NCI-H1975裸小鼠移植瘤的生长。结论本研究结果表明,120120为新结构、强效EGFR三代抑制剂,选择性抑制EGFR耐药突变EGFR~(L858R/T790M),而对EGFR~(WT)抑制活性弱。其对含EGFR~(L858R/T790M)的肿瘤显示出强效体外和体内抗肿瘤活性。该系列化合物已经申请专利,120120值得作为抗肿瘤候选新药进一步开发。 |
| 会议录 | 2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议摘要汇编
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| 文献子类 | Article |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267090]  |
| 专题 | 药理学第一研究室 |
| 作者单位 | 中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国. |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 瞿戎,陈成斌,彭婷,等. 新型EGFR三代抑制剂120120的抗肿瘤作用研究[C]. 见:. |
入库方式： OAI收割
来源：上海药物研究所
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