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一种在贝类幼虫中定量检测甲状腺激素的方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201210545897.7, 申请日期: 2014-01-22, 公开日期: 2014-01-22
作者:  
黄雯
收藏  |  浏览/下载:60/0  |  提交时间:2014/08/04
一种在贝类幼虫中定量检测甲状腺激素的方法  2)研磨后进行低温干燥  3)将A部分样品准确称量干重后  4)8000?12000rpm离心5?10min  5)取步骤4)中的上清  即总甲状腺素T4和总3  6)将B部分样品准确称量干重后加入细胞裂解液和PMSF室温放置1h以上  7)将步骤6)中裂解细胞释放蛋白用于检测样品中总蛋白含量  8)将数据整合  其特征在于:该方法包括如下步骤:1)将幼虫样品用液氮研磨法研磨成粉末状  分成AB两部分分别用于以下步骤  按固定比例加入0.01mol/L?NaOH溶液  取上清  用于定量检测甲状腺激素的含量  5  裂解细胞释放蛋白  计算出幼虫中每克蛋白含甲状腺激素x克  2?8℃下充分浸润1h以上提取甲状腺激素  3′?三碘甲腺原氨酸T3  即xg/gprotein。  
龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200410021012.9, 申请日期: 2005-07-20, 公开日期: 2005-07-20
段德麟; 李文红; 胡自民
收藏  |  浏览/下载:61/0  |  提交时间:2014/08/04
1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法  提取缓冲液的组成为:100mmolL-1Tris.HCl  (2)PCR扩增:龙须菜ITS区扩增的特异引物P1  P2:5’GGGATCCATATGCTTAAGTTCAGCGGGT3’  利用该引物对步骤(1)提取的DNA为模板  (3)PCR产物纯化  (4)DNA序列测定:纯化后的DNA进行序列测定  (5)DNA序列数据分析:待分析的rDNAITS区的序列一经测定  建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的RAPD和ISSR特异指纹图谱  2)RAPD和ISSR引物的合成  3)根据扩增条带的多态性  其特征在于:龙须菜的rDNAITS全序列的获取  pH8.0  P2的序列分别为:P1:5’GGGATCCGTTTCCGTAGGTGAACCTGC3’  位于26S上  对总DNA进行PCR扩增反应  确立rDNAITS区  用对位排列软件ClustalW进行对位排列  步骤如下:1)总DNA提取  从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物  构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的RAPD和ISSR特异指纹图谱。  步骤如下:(1)总DNA提取:取新鲜健康的藻体材料  50-100mmolL-1EDTA  位于18S上  包括ITS1和5.8S区的全序列  并辅以人工校对  用无菌水处理后  0.2-0.5MNaCl  用系统进化分析各样品DNA序列与数据库中各个序列间的差异  在液氮种研磨成粉末  5%β-巯基乙醇  提取总DNA  0.2%PVP-40  1.0-2.5%SDS  提取所用的KAc浓度为4.0-5.0M  pH值范围在5.2-7.5