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	一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24 尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立收藏 \| 浏览/下载：149/0 \| 提交时间：2014/08/04 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 1尾仔鱼/0.05?0.5mL无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼 4)提取总DNA：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μL?5?6mol/L?NaCl溶液其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼加入生理盐水洗涤加入100?300μL?DNA提取缓冲液和10?30μL细胞裂解缓冲液震荡20?30秒。15000g离心30分钟滤去水后立即加入无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水使细胞破壁吸取上清液使蛋白质去除而后于?20℃或室温保存备用再用滤纸吸干样品而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶K和10?100μg?RNA酶然后在上清液中加入等体积异丙醇鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1mL鱼卵/2?5mL无水乙醇重复2?3次震荡混匀轻轻混匀于50?70℃温育 ?20℃静置1?2小时每10?20分钟颠倒混匀一次 15000g离心15分钟消化至溶液澄清沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总DNA。待用
	大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究期刊论文 OAI收割安徽农业科学, 2009, 卷号: 37, 期号: 11, 页码: 4917-4919 作者: 李静; 赵民安; 郝秀英; 王晓军; 曹玉锦收藏 \| 浏览/下载：16/0 \| 提交时间：2012/11/29 大赖草总DNA转化小麦差别显示 RNA 提取反转录活性
	栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN200810015048.4, 申请日期: 2008-09-03, 公开日期: 2008-09-03 宋林生; 李凌; 赵建民收藏 \| 浏览/下载：32/0 \| 提交时间：2014/08/04 1 2)抗病群体和敏感群体的制备 3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选 4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆：参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总DNA 根据已知的G-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体 PCR扩增42个敏感个体和40个抗病个体的G-型溶菌酶启动区序列后其中-754ID和-754II个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别一种栉孔扇贝抗病相关G-型溶菌酶基因标记克隆得到一段762个碱基的DNA序列用病原菌浸泡感染针对-754TATCTCGATCAGG插入/缺失(I/D)及-391A/G转换分别选用Taq I和Hap II对PCR产物进行酶切而-391AA个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体其特征在于它的技术内容包括以下四个方面：1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆连入T载体后进行测序根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力聚丙烯酰胺凝胶电泳后 -391AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备：采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选：对来自5个个体的10个克隆进行了测序各发现两种基因型将-391AA作为疾病敏感相关的G-型溶菌酶基因标记发现了10处多态性位点 -754II 而将-391AG作为抗病相关的G-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查：取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版 -754ID PCR扩增G-型溶菌酶基因启动区序列 -391AA和-391AG 用Hap II对产物进行酶切聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后选择-391AG个体作为抗病个体。
	龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN200410021012.9, 申请日期: 2005-07-20, 公开日期: 2005-07-20 段德麟; 李文红; 胡自民收藏 \| 浏览/下载：61/0 \| 提交时间：2014/08/04 1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法提取缓冲液的组成为：100mmolL-1Tris.HCl (2)PCR扩增：龙须菜ITS区扩增的特异引物P1 P2：5’GGGATCCATATGCTTAAGTTCAGCGGGT3’ 利用该引物对步骤(1)提取的DNA为模板 (3)PCR产物纯化 (4)DNA序列测定：纯化后的DNA进行序列测定 (5)DNA序列数据分析：待分析的rDNAITS区的序列一经测定建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的RAPD和ISSR特异指纹图谱 2)RAPD和ISSR引物的合成 3)根据扩增条带的多态性其特征在于：龙须菜的rDNAITS全序列的获取 pH8.0 P2的序列分别为：P1：5’GGGATCCGTTTCCGTAGGTGAACCTGC3’ 位于26S上对总DNA进行PCR扩增反应确立rDNAITS区用对位排列软件ClustalW进行对位排列步骤如下：1)总DNA提取从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的RAPD和ISSR特异指纹图谱。步骤如下：(1)总DNA提取：取新鲜健康的藻体材料 50-100mmolL-1EDTA 位于18S上包括ITS1和5.8S区的全序列并辅以人工校对用无菌水处理后 0.2-0.5MNaCl 用系统进化分析各样品DNA序列与数据库中各个序列间的差异在液氮种研磨成粉末 5％β-巯基乙醇提取总DNA 0.2％PVP-40 1.0-2.5％SDS 提取所用的KAc浓度为4.0-5.0M pH值范围在5.2-7.5
	用于RAPD分析的沙拐枣DNA提取方法期刊论文 OAI收割中国沙漠, 2001, 期号: 03, 页码: 86-88 陶玲; 刘志学; 何兴东; 刘新民收藏 \| 浏览/下载：21/0 \| 提交时间：2013/03/06 沙拐枣总DNA 提取 SDS法 RAPD
	滇池铜绿微囊藻(M．aeruginosa zosa Kutz)的分离培养与总DNA提取的改进期刊论文 OAI收割湖泊科学, 2001, 卷号: 13, 期号: 3, 页码: 285-287 作者: 陆源[1]; 文建凡[*]; 吕天雯收藏 \| 浏览/下载：12/0 \| 提交时间：2010/08/13 词铜绿微囊藻分离培养总DNA提取