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一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201210424580.8, 申请日期: 2014-05-14, 公开日期: 2014-05-14
韩丽君; 袁毅; 郭书举; 曲桂艳; 刘旭

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一种从泡叶藻中提取制备低分子岩藻聚糖硫酸酯的方法酸浸泡后的泡叶藻固体继续加入其体积3‑6倍的水溶液 2）将上层漂浮物调节至pH5.5‑6.5 将上述依次经稀酸和水浸泡后固态藻体采用纳米高压均质机进行细胞破碎 3）将上述合并液 4）将上述岩藻聚糖硫酸酯粗干品加入其3‑5倍重量的蒸馏水中进行溶解其特征在于：1）将泡叶藻原料于40‑60℃下浸泡提取在泡叶藻原料干藻重量6‑10倍的稀盐酸溶液中1.3‑4.8h 搅拌浸泡4‑7h 在经过滤或高速离心破碎后进行离心分离收集上清液B 过滤液A和上清液B混合均匀后进行超滤去除盐分溶解后通过装有DEAE‑Sepharose F.F.的阴离子交换树脂柱进行洗脱稀酸浸泡液待用收集水浸泡液收集过滤液A 而后超滤浓缩至原料重量的1/2体积（V/W）收集洗脱液透析后于55‑65℃低温浓缩并冷冻干燥获得保留上层漂浮物将稀酸浸泡和水浸泡液合并待用浓缩液进行醇沉淀即得到原藻重量1.5‑2.3％的岩藻聚糖硫酸酯。沉淀物干燥即为岩藻聚糖硫酸酯粗干品

一种从扇贝内脏中提取天然牛磺酸的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310309620.9, 申请日期: 2013-11-27, 公开日期: 2013-11-27
作者: 邢荣娥; 于华华; 李鹏程

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一种从扇贝内脏中提取天然牛磺酸的方法 b)将上述收集的上清液加入活性炭进行脱色处理 c)调节上述收集清液的pH值 d)将上述清液减压浓缩其特征在于：a)以扇贝为原料过滤收集清液而后去除清液中酸性沉淀蛋白质和碱性沉淀蛋白质所得浓缩液经纯化处理即为天然牛磺酸。烘干后用高速粉碎机粉碎待用过滤收集清液粉碎后粉末于蒸馏水中55℃‑80℃ 待用恒温水浴保温1‑3h 过滤收集清液待用

一种从水母触手中分离高纯度未释放刺丝囊的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310140315.1, 申请日期: 2013-08-07, 公开日期: 2013-08-07
作者: 李鹏程; 邢荣娥; 于华华; 秦玉坤

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一种从水母触手中分离高纯度未释放刺丝囊的方法其特征在于：将冷冻溶解后水母触手离心收集上清液上清液经离心后收集沉淀将沉淀用海水溶解后过滤收集滤液离心后收集的沉淀为高纯度未释放的水母刺丝囊。

一种鲐鱼活性肽的制备方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310002099.4, 申请日期: 2013-05-08, 公开日期: 2013-05-08
作者: 于华华; 邢荣娥; 李鹏程; 秦玉坤

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一种鲐鱼活性肽的制备方法调节pH值后加入蛋白酶进行酶解反应5h~8h 其中每克经绞碎的原材料鲐鱼中加入1000U~2000U酶活力单位的蛋白酶。其特征在于：以鲐鱼作为原材料经绞碎反应完毕后加入去离子水置于恒温水浴中经搅拌保温5~10min 酶灭活再调节pH值离心收集上清液冷冻干燥即得鲐鱼活性肽

一种从沙蜇刺丝囊毒素内分离溶血毒素蛋白的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201110414952.4, 申请日期: 2012-06-27, 公开日期: 2012-06-27
作者: 于华华; 邢荣娥; 李鹏程; 秦玉坤

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一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离溶血毒素蛋白的方法所述洗脱液为含不同浓度NaCl的磷酸缓冲液收集采用含0.2M?NaCl的磷酸缓冲液洗脱下的组分 2)将上述所得洗脱组分经微孔滤膜过滤其特征在于：1)将处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液经微孔滤膜过滤 NaCl浓度分别为0 滤液经凝胶色谱柱Superdex200采用0.15M?NaCl 滤液经含DEAE?Sepharose?Fast?Flow阴离子交换柱 0.1 10～50mM 采用洗脱液以1?3mLmin?1流速进行纯化分离 0.2 pH7.0PBS缓冲液以0.2～1.0mLmin?1流速进行分离纯化收集洗脱液在低温下用3～5K的超滤管进行浓缩 0.3和2M 收集洗脱体积处于60～80mL的洗脱液待用而后在2～6℃下用3～5K的超滤管进行浓缩浓缩后即得到从沙蜇刺丝囊毒素中分离溶血毒素蛋白。

一种从霞水母刺丝囊毒素内分离致死毒素蛋白的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027667.7, 申请日期: 2011-09-07, 公开日期: 2011-09-07
作者: 于华华; 邢荣娥; 李鹏程; 秦玉坤

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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白的方法 2)将上述步骤1)上清液于2～6℃下用缓冲液透析过夜 3)将步骤2)所得上清液过滤 4)将步骤3)得到的上清液用强阴离子交换树脂Mono?Q预装柱纯化分离其特征在于：1)将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎然后低温离心而后用含Con?A?Sepharose?4B亲和柱进行分离依次采用pH7.8 破碎后2～6℃离心收集上清液分离时采用含有0.1～0.3Mα?甲基?D?甘露糖苷和0.1～0.3MNaCl的pH7.4 浓度为10～30mM的Tris?HCl缓冲液和含1M?NaCl的pH7.8 收集上清液待用浓度10～30mM的Tris?HCl缓冲液进行洗脱并收集洗脱液浓度为10～30mM的Tris?HCl缓冲液进行梯度洗脱待用低温离心流速为0.2～0.5mLmin?1 收集上清液收集约25～40min洗脱液待用即为从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白。

一种从霞水母刺丝囊毒素内分离热激蛋白60的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201010596892.8, 申请日期: 2011-08-17, 公开日期: 2011-08-17
作者: 邢荣娥; 李鹏程; 于华华; 秦玉坤

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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离热激蛋白60的方法 2)步骤1)所得上清液即为霞水母刺丝囊细胞毒素于2?6℃下对pH7.820mM?Tris?HCl缓冲液透析过夜 3)将步骤2)所得上清液过滤 4)将步骤3)用截留分子量为3kDa的超滤管浓缩的浓缩物用凝胶树脂Superdex75柱纯化分离其特征在于：1)将从霞水母触手中得到的霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎然后低温离心而后将其上含DEAE?SepharoseFast?Flow的阴离子交换树柱进行分离采用含有浓度为0.15?0.5M的NaCl的pH7.820mM?Tris?HCl缓冲液洗脱破碎后低温离心收集上清液首先采用pH7.820mMTris?HCl缓冲液洗脱流速为0.2?0.5mLmin?1 收集上清液待用而后采用含有浓度分别为0.1?2M不同浓度的NaCl的pH7.820mM?Tris?HCl缓冲液进行梯度洗脱收集各洗脱峰待用收集各洗脱峰其中流出体积50mL?80mL内的组分即为热激蛋白60。而后用截留分子量为3kDa的超滤管浓缩待用

一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23
刘淮德; 王雷; 刘梅; 王宝杰; 蒋克勇

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一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 2)将洗脱液在200g离心5-10min 沉淀中加0.8-1.2mL?PBS以200g离心取上清菌液 3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min 4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μLCTAB提取液和10-15μL溶菌酶而后加15-20μL?20％(W/C)SDS和10-15μL蛋白酶K 5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min 6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min 7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇 8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μL?70％预冷乙醇其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨取上清菌液待用将两次离心所得上清菌液合并收集上清菌液放入37℃摇床 60-70℃水浴1-2h 取上清菌液取上清菌液而后于-20℃静置1-2h 14000g离心10-15min 并加入0.8-1.2mL?PBS 合并上清液以300g离心5-10min 振荡30-40min 而后加100-150μL?CTAB液和20-25μL?20％SDS混匀后而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液再以4℃?14000g离心10-15min 所得沉淀即为对虾肠道微生物DNA。 15-25μL?PVPP匀浆和200-300μL?0.5％Tween-80 取上清菌液待用涡旋 14000g离心10-15min 所得沉淀待用均匀后吹打洗脱3-5min 60-70℃水浴10-15min 取上清菌液待用

一种分离纯化组蛋白H4的方法 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200610047932.7, 申请日期: 2008-04-02, 公开日期: 2008-04-02
作者: 邢荣娥; 李鹏程; 于华华

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1 而后将其在相对离心力为9160-29700g下离心10-30min (2)分离纯化：①加样前样品预处理：将步骤1)得到的样品在2℃-6℃下加入到离子交换剂中 ②将已吸附蛋白的离子交换剂注入到层析柱中 ③洗脱：采用含有NaCl的缓冲液一种分离纯化组蛋白H4的方法取上清液备用每隔8-12min搅拌一次用3-5倍床体积的缓冲液淋洗以60-90ml/h的洗脱速度进行阶段性洗脱其特征在于包括以下步骤：(1)提取样品：将50g-150g的海蜇样品破碎共搅拌2-6次收集组分。然后加入样品重量0.5-4倍的缓冲液而后在相对离心力为573-1467g下放入2℃-6℃下离心5-10min 浸泡0.5-48hh 弃去上清液

中国对虾抗菌肽基因的重组表达与应用 专利 OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN03112294.9, 申请日期: 2003-12-03, 公开日期: 2003-12-03
作者: 相建海

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1.中国对虾抗菌肽基因的重组表达方法所述的转化与筛选是：将构建得到的载体分别转化大肠杆菌和酵母菌及转染昆虫细胞所述的表达产物鉴定包括重组载体构建筛选工程菌株或细胞并诱导表达纯化和抗菌谱测定是：采用诱导剂诱导表达的工程菌转化与筛选和表达产物鉴定破细胞收集上清液纯化和抗菌谱测定其特征在于分泌型表达的细胞直接收集上清液所述的重组载体构建是：根据已克隆到的对虾素成熟肽的cDNA序列采用层析的方法纯化抗菌肽利用特异引物在其两端引入两个不同的限制性内切酶位点并测定抗菌谱。亚克隆到表达载体载体包括pET系列 pGEX-4T系列 pPIC系列 pAO815和杆状病毒表达载体