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	一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24 尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立收藏 \| 浏览/下载：150/0 \| 提交时间：2014/08/04 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 1尾仔鱼/0.05?0.5mL无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼 4)提取总DNA：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μL?5?6mol/L?NaCl溶液其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼加入生理盐水洗涤加入100?300μL?DNA提取缓冲液和10?30μL细胞裂解缓冲液震荡20?30秒。15000g离心30分钟滤去水后立即加入无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水使细胞破壁吸取上清液使蛋白质去除而后于?20℃或室温保存备用再用滤纸吸干样品而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶K和10?100μg?RNA酶然后在上清液中加入等体积异丙醇鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1mL鱼卵/2?5mL无水乙醇重复2?3次震荡混匀轻轻混匀于50?70℃温育 ?20℃静置1?2小时每10?20分钟颠倒混匀一次 15000g离心15分钟消化至溶液澄清沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总DNA。待用
	一种对虾肠道微生物DNA的提取方法专利 OAI收割专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23 刘淮德; 王雷; 刘梅; 王宝杰; 蒋克勇收藏 \| 浏览/下载：31/0 \| 提交时间：2014/08/04 一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 2)将洗脱液在200g离心5-10min 沉淀中加0.8-1.2mL?PBS以200g离心取上清菌液 3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min 4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μLCTAB提取液和10-15μL溶菌酶而后加15-20μL?20％(W/C)SDS和10-15μL蛋白酶K 5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min 6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min 7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇 8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μL?70％预冷乙醇其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨取上清菌液待用将两次离心所得上清菌液合并收集上清菌液放入37℃摇床 60-70℃水浴1-2h 取上清菌液取上清菌液而后于-20℃静置1-2h 14000g离心10-15min 并加入0.8-1.2mL?PBS 合并上清液以300g离心5-10min 振荡30-40min 而后加100-150μL?CTAB液和20-25μL?20％SDS混匀后而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液再以4℃?14000g离心10-15min 所得沉淀即为对虾肠道微生物DNA。 15-25μL?PVPP匀浆和200-300μL?0.5％Tween-80 取上清菌液待用涡旋 14000g离心10-15min 所得沉淀待用均匀后吹打洗脱3-5min 60-70℃水浴10-15min 取上清菌液待用
	广义模糊聚类及其在T-S模型辨识中的应用学位论文 OAI收割工学硕士, 中国科学院自动化研究所: 中国科学院研究生院, 2001 肖颻收藏 \| 浏览/下载：44/0 \| 提交时间：2015/09/02 T-S模型模糊聚类 G-K方法 AFC方法系统辨识 T-S model Identification fuzzy clustering G-K FCM AFC