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一种夏鲆冻精与牙鲆种间杂交人工授精的方法
专利
OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310212970.3, 申请日期: 2013-10-16, 公开日期: 2013-10-16
刘清华
;
李军
;
徐世宏
;
马道远
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提交时间:2014/08/04
一种夏鲆冻精与牙鲆种间杂交人工授精的方法
其中
其特征在于:将长期超低温冷冻保存的夏鲆精子经二步水浴解冻
稀释液为NaCl
溶解后夏鲆冻精中加入其3倍体积的稀释液
KH2PO4和水组成。
离心收集沉淀
而后与牙鲆卵子进行人工授精
一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法
专利
OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213012.8, 申请日期: 2013-10-16, 公开日期: 2013-10-16
刘清华
;
李军
;
肖志忠
;
韩龙江
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浏览/下载:18/0
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提交时间:2014/08/04
一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法
抗冻液由稀释液
抗冻剂为终浓度60%(V/V)的DMSO(二甲基亚砜)或终浓度60%(V/V)
添加剂:蔗糖34.2g/L和终浓度10%的蛋黄(V/V)。
其特征在于:将大菱鲆的精液与抗冻液按体积比3:1‑4:1的比例混合
抗冻剂
的丙二醇(PG)
混合后经过两步降温处理
添加剂三部分组成其中
一步平衡后投入到液氮(‑196℃)
稀释液为NaCl8g/L
分装保存
KCl0.4g/L
MgSO4·7H2O0.1g/L
MgCl2·6H2O0.1g/L
Na2HPO4·2H2O0.06g/L
KH2PO40.06g/L
NaHCO30.35g/L
太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法
专利
OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310214264.2, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
刘清华
;
李军
;
于道德
;
官曙光
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提交时间:2014/08/04
一种太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法
孵育后以分段方式降温处理
处理后投入到液氮(‑196℃)
所述抗冻液由稀释液
抗冻剂为终浓度10%(V/V)的丙二醇(PG)
添加剂为:终浓度5%(V/V)的蛋黄和终浓度5%BSA(V/V)。
其特征在于:将太平洋鳕鱼精液与抗冻液以1:4‑1:3的体积比例混合
分装保存
抗冻剂
混合后在0‑4℃孵育平衡8‑10分钟
添加剂组成
其中稀释液为:NaCl 8g/L
Na2HPO4·2H2O0.6g/L
KH2PO40.6g/L
海藻糖37.8g/L
一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法
专利
OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213169.0, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
刘清华
;
李军
;
徐世宏
;
韩龙江
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浏览/下载:33/0
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提交时间:2014/08/04
一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法
处理后投入到液氮(‑196℃)
所述抗冻液由稀释液
其中
抗冻剂为终浓度8%的(V/V)DMSO(二甲基亚砜)和终浓度7%的(V/V)Gly(甘油)
添加剂:5mM还原型谷胱甘肽
其特征在于:将星斑川鲽的精液与抗冻液按体积比1:3的比例混合
分装保存
抗冻剂和添加剂组成
稀释液为100mM蔗糖
50mM牛磺酸
在0℃孵育6‑8分钟
100mM KHCO3
10%蛋黄(V/V)。
孵育后以分段方式降温处理
25mM NaHCO3
一种大黄鱼精子遗传物质完全失活的方法
专利
OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200510136709.5, 申请日期: 2007-07-04, 公开日期: 2007-07-04
许建和
;
尤锋
;
张培军
;
吴雄飞
;
徐永立
;
蒋宏雷
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提交时间:2014/08/04
权利要求书1
②精液稀释:采用预冷的稀释液稀释所述大黄鱼成熟精液
其中:按重量体积百分比计所述预冷的稀释液成份为NaCl 0.60~0.80%
pH
稀释液预冷到0~5℃
③精子遗传物质失活:紫外光源预热5~10min后
其中:紫外光源的照射剂量为1800~6000erg/mm2。
一种大黄鱼精子遗传物质完全灭活的方法
稀释倍数为20~100倍
KCl 0.03~0.05%
7.0~7.3
将带有稀释后的大黄鱼成熟精液的培养皿置于紫外光源下
包括:精液保存
然后将稀释后的大黄鱼成熟精液放入已预冷到0~5℃的培养皿中
CaCl2
照射1.5~5min
精液稀释
其培养皿中稀释后的大黄鱼成熟精液液体厚度为0.1~0.3cm
0.01~0.03%
使得大黄鱼遗传物质失活
精子遗传物质失活
葡萄糖0.05~0.10%
其特征在于:①精液保存:将人工挤出的未激活的大黄鱼成熟精液避光保存于2~4℃低温条件下备用
一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法
专利
OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200510047579.8, 申请日期: 2007-05-02, 公开日期: 2007-05-02
朱香萍
;
尤锋
;
张培军
;
孙威
;
徐永立
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提交时间:2014/08/04
权利要求书1
②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵
③在常温下用浓度百分比为1-2%的Triton-100对样品进行打孔处理
其中:磷酸盐缓冲液成分为128mM NaCl
④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色
抚育一抗过夜
清洗液为含有155mM NaCl
抗体稀释液含有浓度百分比为10%的山羊血清和5%的二甲亚砜的Tris盐酸缓冲液
⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。
一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法
并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来
再在含有80-200mM NaBH4的磷酸盐缓冲液中
2mM KCl
其中:抚育抗体前非特异结合位点不封闭
抚育二抗为避光2-4小时
10mM Tris-Cl
其特征在于包括步骤如下:①采用改进的哌嗪-N
室温下抚育6-16小时
8mM NaH2PO4
pH为7.2-7.4的Tris盐酸缓冲液
N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定
2mMKH2PO4
及诺纳德P-40
受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时
pH 7.2-7.4
其中诺纳德P-40占Tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2%
磷酸吐温缓冲溶液清洗
然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存
待用
改进的猕猴精子冷冻保存方法
会议论文
OAI收割
中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会, 中国浙江杭州, 2006-05
作者:
采克俊
;
李亚辉
;
季维智
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提交时间:2017/05/09
猕猴
精子
冷冻保存
化学成分确定稀释液
猕猴精子冷冻保存方法的改进及活率检测
学位论文
OAI收割
博士, 北京: 中国科学院研究生院, 2005
作者:
采克俊
收藏
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浏览/下载:43/0
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提交时间:2010/10/15
猕猴
精子
冷冻保存
化学成分确定稀释液
流式细胞术
凯氏定氮法测定牙鲆肌肉粗蛋白含量方法的改进
CNKI期刊论文
OAI收割
1999
作者:
刘宗柱,朱凤华,徐永立,张培军
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提交时间:2024/12/18
凯氏定氮法
粗蛋白含量
滴定法
氨氮浓度
浓硫酸
稀释液
凯氏定氮法测定牙鲆肌肉粗蛋白含量方法的改进
期刊论文
OAI收割
海洋科学, 1999, 期号: 6, 页码: 1-3
刘宗柱
;
朱凤华
;
徐永立
;
张培军
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浏览/下载:21/0
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提交时间:2013/10/08
凯氏定氮法:7756
粗蛋白含量:5415
比色法测定:1522
牙鲆:1285
中国科学院:1243
稀释液:1064
氨氮浓度:1014
海洋研究所:987
含量测定:965
标准曲线:959