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一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201210112325.X, 申请日期: 2012-10-10, 公开日期: 2012-10-10
作者:  刘保忠
收藏  |  浏览/下载：30/0  |  提交时间：2014/08/04
一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法  2)引物设计：在微卫星重复的侧翼序列利用软件Primer?Premier?5.0设计引物  GC含量为40％?60％  退火温度为45?65℃  预期PCR产物长度为100?400bp  3)引物优化：根据不同引物的Tm值进行温度梯度优化  4)微卫星标记家系鉴定体系的确立：微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(PIC)衡量  包括微卫星位点来源  引物设计条件为：引物长度为19?25mer  在Tm值上下各10℃  根据上述优化获得的Ta值  引物设计  温度梯度优化扩增得到的PCR产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳?EB染色系统进行检测  选取多个体作为群体进行计算微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(PIC)进而衡量多态性信息  引物优化和微卫星标记家系鉴定体系  选取杂带较少  根据PIC值  其特征在于：1)微卫星位点的来源：提取文蛤的基因组DNA利用提取的DNA  特异性产物亮度较高的PCR反应对应的温度为该引物的最佳退火温度Ta  PIC小于0.25的标记  采用限制性内切酶法获得文蛤基因组DNA片段  筛选得到重复性好  并构建微卫星磁珠富集文库  稳定性好  检测阳性克隆  PIC值大于0.25的位点  经测序得到含有微卫星重复的DNA序列  作为文蛤微卫星标记家系鉴定体系  用于文蛤的家系区分与个体识别。  
一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立
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一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法  1尾仔鱼/0.05?0.5mL无水乙醇  2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品  3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼  4)提取总DNA：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μL?5?6mol/L?NaCl溶液  其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼  加入生理盐水洗涤  加入100?300μL?DNA提取缓冲液和10?30μL细胞裂解缓冲液  震荡20?30秒。15000g离心30分钟  滤去水后立即加入无水乙醇  1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水  使细胞破壁  吸取上清液使蛋白质去除  而后于?20℃或室温保存备用  再用滤纸吸干样品  而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶K和10?100μg?RNA酶  然后在上清液中加入等体积异丙醇  鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1mL鱼卵/2?5mL无水乙醇  重复2?3次  震荡混匀  轻轻混匀  于50?70℃温育  ?20℃静置1?2小时  每10?20分钟颠倒混匀一次  15000g离心15分钟  消化至溶液澄清  沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总DNA。  待用  
一种海蜇基因组DNA的提取方法-1 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN201010166122.X, 申请日期: 2011-03-23, 公开日期: 2011-03-23
崔朝霞; 张姝; 栾维莎; 刘媛
收藏  |  浏览/下载：30/0  |  提交时间：2014/08/04
一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23
刘淮德; 王雷; 刘梅; 王宝杰; 蒋克勇
收藏  |  浏览/下载：31/0  |  提交时间：2014/08/04
一种对虾肠道微生物DNA的提取方法  2)将洗脱液在200g离心5-10min  沉淀中加0.8-1.2mL?PBS以200g离心取上清菌液  3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min  4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μLCTAB提取液和10-15μL溶菌酶  而后加15-20μL?20％(W/C)SDS和10-15μL蛋白酶K  5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min  6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min  7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇  8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μL?70％预冷乙醇  其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨  取上清菌液待用  将两次离心所得上清菌液合并  收集上清菌液  放入37℃摇床  60-70℃水浴1-2h  取上清菌液  取上清菌液  而后于-20℃静置1-2h  14000g离心10-15min  并加入0.8-1.2mL?PBS  合并上清液以300g离心5-10min  振荡30-40min  而后加100-150μL?CTAB液和20-25μL?20％SDS混匀后  而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液  再以4℃?14000g离心10-15min  所得沉淀即为对虾肠道微生物DNA。  15-25μL?PVPP匀浆和200-300μL?0.5％Tween-80  取上清菌液待用  涡旋  14000g离心10-15min  所得沉淀待用  均匀后吹打洗脱3-5min  60-70℃水浴10-15min  取上清菌液待用  
一种海蜇基因组DNA的提取方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200710015295.X, 申请日期: 2009-01-14, 公开日期: 2009-01-14
崔朝霞; 张姝; 栾维莎; 刘媛
收藏  |  浏览/下载：86/0  |  提交时间：2014/08/04
1.一种海蛰基因组DNA提取方法  2)将步骤1)得到的原料内加入3～5ul浓度为20mg/ml的蛋白酶K  3)在步骤2)澄清溶液中加入与其等体积的苯酚  而后向上清液中加入上清液的0.7～1倍体积的异丙醇  其中苯酚  其特征在于：1)将海蜇无性世代的海蛰螅状体用手术剪刀剪碎至无明显颗粒状组织  在55～56℃消化24～26小时至溶液澄清  氯仿和异戊醇的混合溶液混匀  -20～-18℃沉淀10～15分钟  氯仿和异戊醇按体积份数比为25∶24∶1  加入CTAB buffer300～400ul  待用  离心  沉淀后取出  氯仿和异戊醇按体积份数比为24∶1。  待用  吸上清  离心  再加入与上清液等体积的氯仿和异戊醇混合液混匀  弃去液体  离心  并用体积浓度为70％的乙醇  吸上清  离心洗1～2次  将多余液体倒去室温自然凉干  即得到海蛰螅状体的基因组DNA  
栉孔扇贝G-型溶菌酶基因多态性标记筛选及其辅助育种方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200810015048.4, 申请日期: 2008-09-03, 公开日期: 2008-09-03
宋林生; 李凌; 赵建民
收藏  |  浏览/下载：34/0  |  提交时间：2014/08/04
1  2)抗病群体和敏感群体的制备  3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选  4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查。1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆：参照分子克隆所述方法从栉孔扇贝闭壳肌中提取总DNA  根据已知的G-型溶菌酶基因序列在其启动子区设计引物  即从不同海区和养殖场收集栉孔扇贝个体  PCR扩增42个敏感个体和40个抗病个体的G-型溶菌酶启动区序列后  其中-754ID和-754II个体在抗病群体和敏感群体中出现的频率无显著差别  一种栉孔扇贝抗病相关G-型溶菌酶基因标记  克隆得到一段762个碱基的DNA序列  用病原菌浸泡感染  针对-754TATCTCGATCAGG插入/缺失(I/D)及-391A/G转换分别选用Taq I和Hap II对PCR产物进行酶切  而-391AA个体在敏感群体中出现的频率显著高于抗病群体  其特征在于它的技术内容包括以下四个方面：1)栉孔扇贝G-型溶菌酶基因启动区部分序列的克隆  连入T载体后进行测序  根据死亡时间判断扇贝对病原菌感染抵抗能力  聚丙烯酰胺凝胶电泳后  -391AG个体在抗病群体中出现的频率显著高于敏感群体。因此  获得其核苷酸序列。2)抗病群体和敏感群体的制备：采用人工感染的方法获得抗病群体和敏感群体  将扇贝分为抗病群体和敏感群体。3)抗病相关G-型溶菌酶基因标记的筛选：对来自5个个体的10个克隆进行了测序  各发现两种基因型  将-391AA作为疾病敏感相关的G-型溶菌酶基因标记  发现了10处多态性位点  -754II  而将-391AG作为抗病相关的G-型溶菌酶基因标记。4)携带抗病相关基因标记个体的快速筛查：取栉孔扇贝个体全血1μl作为模版  -754ID  PCR扩增G-型溶菌酶基因启动区序列  -391AA和-391AG  用Hap II对产物进行酶切  聚丙烯酰胺凝胶电泳分型后  选择-391AG个体作为抗病个体。  
一种制备海带孢子体大分子量DNA的方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200410011416.X, 申请日期: 2006-07-12, 公开日期: 2006-07-12
段德麟; 王高歌; 胡自民
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龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法 专利  OAI收割
专利类型: 发明, 专利号: CN200410021012.9, 申请日期: 2005-07-20, 公开日期: 2005-07-20
段德麟; 李文红; 胡自民
收藏  |  浏览/下载：62/0  |  提交时间：2014/08/04
1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法  提取缓冲液的组成为：100mmolL-1Tris.HCl  (2)PCR扩增：龙须菜ITS区扩增的特异引物P1  P2：5’GGGATCCATATGCTTAAGTTCAGCGGGT3’  利用该引物对步骤(1)提取的DNA为模板  (3)PCR产物纯化  (4)DNA序列测定：纯化后的DNA进行序列测定  (5)DNA序列数据分析：待分析的rDNAITS区的序列一经测定  建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的RAPD和ISSR特异指纹图谱  2)RAPD和ISSR引物的合成  3)根据扩增条带的多态性  其特征在于：龙须菜的rDNAITS全序列的获取  pH8.0  P2的序列分别为：P1：5’GGGATCCGTTTCCGTAGGTGAACCTGC3’  位于26S上  对总DNA进行PCR扩增反应  确立rDNAITS区  用对位排列软件ClustalW进行对位排列  步骤如下：1)总DNA提取  从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物  构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的RAPD和ISSR特异指纹图谱。  步骤如下：(1)总DNA提取：取新鲜健康的藻体材料  50-100mmolL-1EDTA  位于18S上  包括ITS1和5.8S区的全序列  并辅以人工校对  用无菌水处理后  0.2-0.5MNaCl  用系统进化分析各样品DNA序列与数据库中各个序列间的差异  在液氮种研磨成粉末  5％β-巯基乙醇  提取总DNA  0.2％PVP-40  1.0-2.5％SDS  提取所用的KAc浓度为4.0-5.0M  pH值范围在5.2-7.5  
Frankia基因组DNA提取及其PCR带型 期刊论文  OAI收割
微生物学杂志, 1997, 期号: 03, 页码: 1-4
作者:  彭源东,柯丹兵,张忠泽
  |  收藏  |  浏览/下载：17/0  |  提交时间：2011/05/05
Frankia基因组DNA提取及其PCR带型 期刊论文  OAI收割
微生物学杂志, 1997, 期号: 03, 页码: 1-4
彭源东,柯丹兵,张忠泽
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